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目的:研究槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、细胞周期的影响,建立Wnt/β-catenin信号转导通路报告基因模型,研究槲皮素对SW480细胞Wnt/β-catenin信号转导的调控作用和对Wnt/β-catenin信号转导通路相关基因的影响。探讨槲皮素抗肿瘤作用机理,为槲皮素作为抗肿瘤药物开发提供理论依据。方法:1.采用MTT比色法检测槲皮素对人结肠癌细胞SW480细胞增殖反应的作用;2.用流式细胞技术分析槲皮素对人结肠癌细胞SW480细胞周期、凋亡的影响。3.采用Western blot分析槲皮素对SW480细胞cyclin B1蛋白表达的影响。4.建立Wnt/β-catenin信号转导通路报告基因模型,研究槲皮素对SW480细胞Wnt/β-catenin信号转导通路的调控作用。5.用半定量RT-PCR和Western blot方法研究槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导通路β-catenin/TCF下游靶基因cyclin D1和survivin mRNA及蛋白表达的影响。6.统计学方法:所有数据采用SPSS 12.0软件进行统计学处理。实验结果均以x±S表示,组内比较采用单因素方差分析,多个实验组均数与一个对照组均数比较用Dunnett-t检验,回归方程间比较用t检验与方差分析,以α=0.05或α=0.01为检验水准。结果:1.槲皮素抑制SW480细胞增殖MTT检测结果显示,40、80、160μmol/L的槲皮素对SW480细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),高浓度槲皮素组与低浓度组比较,对SW480细胞抑制作用也明显差异(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(r=0.99, P=0.00)。2.槲皮素可诱导SW480细胞周期阻滞和细胞凋亡流式细胞术检测结果显示,40、60、80μmol/L的槲皮素作用SW480细胞48 h后,G0/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞显著增多(P<0.01)。槲皮素可以剂量依赖性地诱导SW480细胞凋亡,80μmol/L的槲皮素作用48 h后,细胞凋亡率(13.32%±4.62%)明显升高,与对照组(2.68%±1.04%)相比有显著性差异(P<0.01)。3.槲皮素可明显下调SW480细胞cyclin B1蛋白的表达经槲皮素作用48 h后,SW480细胞cyclin B1蛋白表达水平明显下降(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性(r=0.999, P=0.001)。4.槲皮素可以明显下调SW480细胞TCF-4报告基因TOPFLASH活性应用双荧光素酶报告基因质粒TOPFLASH/FOPFLASH及内参照质粒pRL-null瞬时转染SW480细胞,建立了Wnt/β-catenin信号转导通路双荧光素酶报告基因模型。经分析结果显示,槲皮素处理转染报告基因的SW480细胞24 h后,TCF-4报告基因TOPFLASH活性显著降低,160μ?mol/L槲皮素作用24 h后,TOPFLASH报告基因RLU值由对照组的195.65±12.25降至11.54±5.60,差异有统计学意义(P<0.05),但FOPFLASH活性没有明显的变化(P>0.05),提示槲皮素可剂量依赖性抑制β-catenin/TCF的转录活性。5.槲皮素可显著下调SW480细胞cyclin D1和survivin mRNA表达和蛋白表达水平60、120μmol/L槲皮素作用24 h后,SW480细胞cyclin D1和survivin mRNA表达和蛋白表达水平均显著下降,抑制作用呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:槲皮素可明显抑制SW480细胞增殖,诱导细胞凋亡,将SW480细胞周期阻滞于G2/M期。槲皮素可剂量依赖性抑制β-catenin/TCF的转录活性,下调β-catenin/TCF下游靶基因cyclin D1和survivin的mRNA表达和蛋白表达水平,提示其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。