槲皮素对结肠癌细胞抑制作用及对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响

被引量 : 0次 | 上传用户:BalloonMan_Again
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:研究槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、细胞周期的影响,建立Wnt/β-catenin信号转导通路报告基因模型,研究槲皮素对SW480细胞Wnt/β-catenin信号转导的调控作用和对Wnt/β-catenin信号转导通路相关基因的影响。探讨槲皮素抗肿瘤作用机理,为槲皮素作为抗肿瘤药物开发提供理论依据。方法:1.采用MTT比色法检测槲皮素对人结肠癌细胞SW480细胞增殖反应的作用;2.用流式细胞技术分析槲皮素对人结肠癌细胞SW480细胞周期、凋亡的影响。3.采用Western blot分析槲皮素对SW480细胞cyclin B1蛋白表达的影响。4.建立Wnt/β-catenin信号转导通路报告基因模型,研究槲皮素对SW480细胞Wnt/β-catenin信号转导通路的调控作用。5.用半定量RT-PCR和Western blot方法研究槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导通路β-catenin/TCF下游靶基因cyclin D1和survivin mRNA及蛋白表达的影响。6.统计学方法:所有数据采用SPSS 12.0软件进行统计学处理。实验结果均以x±S表示,组内比较采用单因素方差分析,多个实验组均数与一个对照组均数比较用Dunnett-t检验,回归方程间比较用t检验与方差分析,以α=0.05或α=0.01为检验水准。结果:1.槲皮素抑制SW480细胞增殖MTT检测结果显示,40、80、160μmol/L的槲皮素对SW480细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),高浓度槲皮素组与低浓度组比较,对SW480细胞抑制作用也明显差异(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(r=0.99, P=0.00)。2.槲皮素可诱导SW480细胞周期阻滞和细胞凋亡流式细胞术检测结果显示,40、60、80μmol/L的槲皮素作用SW480细胞48 h后,G0/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞显著增多(P<0.01)。槲皮素可以剂量依赖性地诱导SW480细胞凋亡,80μmol/L的槲皮素作用48 h后,细胞凋亡率(13.32%±4.62%)明显升高,与对照组(2.68%±1.04%)相比有显著性差异(P<0.01)。3.槲皮素可明显下调SW480细胞cyclin B1蛋白的表达经槲皮素作用48 h后,SW480细胞cyclin B1蛋白表达水平明显下降(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性(r=0.999, P=0.001)。4.槲皮素可以明显下调SW480细胞TCF-4报告基因TOPFLASH活性应用双荧光素酶报告基因质粒TOPFLASH/FOPFLASH及内参照质粒pRL-null瞬时转染SW480细胞,建立了Wnt/β-catenin信号转导通路双荧光素酶报告基因模型。经分析结果显示,槲皮素处理转染报告基因的SW480细胞24 h后,TCF-4报告基因TOPFLASH活性显著降低,160μ?mol/L槲皮素作用24 h后,TOPFLASH报告基因RLU值由对照组的195.65±12.25降至11.54±5.60,差异有统计学意义(P<0.05),但FOPFLASH活性没有明显的变化(P>0.05),提示槲皮素可剂量依赖性抑制β-catenin/TCF的转录活性。5.槲皮素可显著下调SW480细胞cyclin D1和survivin mRNA表达和蛋白表达水平60、120μmol/L槲皮素作用24 h后,SW480细胞cyclin D1和survivin mRNA表达和蛋白表达水平均显著下降,抑制作用呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:槲皮素可明显抑制SW480细胞增殖,诱导细胞凋亡,将SW480细胞周期阻滞于G2/M期。槲皮素可剂量依赖性抑制β-catenin/TCF的转录活性,下调β-catenin/TCF下游靶基因cyclin D1和survivin的mRNA表达和蛋白表达水平,提示其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。
其他文献
DNl50野战管线是给作战部队输送油料的机动管线,其管材为X60JY带钢。分析了野战管线的腐蚀原因、防腐层应具备的性能及其防腐方式,指出管线外层适宜采用镀锌防腐,内层适宜采用环
目的探讨急性重症胰腺炎(SAP)继发门静脉、脾静脉血栓的病因及临床治疗策略。方法回顾性分析2012年1月年至2017年12月该科室收治的SAP患者继发脾静脉、门静脉血栓情况、处理
目的:研究不同剂量参附注射液(Shenfu Injection,SFI)对心力衰竭(Heart failure,HF)大鼠地高辛(digoxin,DG)组织浓度的影响。方法:造模成功HF大鼠60只随机分为对照组(只用DG)
本文基于国家统计局“城调队”1991年、1995年、2000年和2004年中国城镇住户调查数据,采用计量回归方法,对我国城镇居民个人教育投资风险进行了实证研究。研究结果表明:第一,
在当今的游泳竞赛中,大多运动员和教练均侧重于体能的训练和提高,但在运动员泳姿的游行动作的改进上所下的功夫远远小于对体能训练的投入。本文是在学习、研究流体力学理论的
针对高三复习阶段教师累、学生苦而语文复习效率低下的现状,教师的要点在于&#39;导&#39;,引导学生掌握科学合理的学习方法,催生学生学习语文的欲望和激活学习的激情,引导学生
在采访刘斐之前,我仅从朋友口中了解了一些基本情况,而并没有特意去收集有关他的资料。因为我猜想,在他简单而不失华丽的珠宝设计背后,一定会有一些动人的故事……坐在格调高
期刊
<正>奖项特别大奖(珠宝设计类)作者姓名方红军作品名称明代徽州马头墙高低(?)落,从外形看颇具风格,因而不仅是中国南方徽派建筑常用格式之一,也是徽派建筑的重要造型特色,曾
期刊
近年来建筑企业面临的市场竞争越来越激烈,如何在保证工程质量的同时,为企业创造更多的经济效益,成为人们普遍关注的问题。基于此,文章主要对建筑工程造价超预算的原因进行分
教书育人是教师的光荣职责,爱岗敬业又是育人的基础和前提,所以教育家夸美纽斯将教师职业比喻成太阳底下最光辉的事业。人们也把教师比喻成辛勤的园丁!教师是光荣的,播种着人
期刊