论文部分内容阅读
抗菌肽由于其广谱抗菌活性,不易产生耐药性等特性而倍受关注,开发为新型饲料添加剂,已应用于猪、禽等动物,但在反刍动物的应用研究还鲜有报道。本研究运用高通量测序技术与实时荧光定量PCR技术比较分析复合抗菌肽“态康利保”对山羊瘤胃纤毛虫群落结构及常见纤毛虫数量的影响及其与精料量的关系,为复合抗菌肽“态康利保”作为饲料添加剂应用于反刍动物提供理论依据。试验选取24只4月龄体重相近（16.17±0.72）kg临床健康雄性川中黑山羊,随机分为4组,每组6只。Ⅰ组（正常精料组）饲喂正常量精料300 g·d-1·goat-1,Ⅱ组（正常量精料+抗菌肽组）饲喂正常量精料+态康利保3 g·d-1·goat-1,Ⅲ组（双倍精料组）饲喂精料600 g·d-1·goat-1;Ⅳ组（双倍精料+抗菌肽组）饲喂双倍精料+态康利保3g·d-1·goat-1,连续饲喂60 d。于试验第0 d,20 d和60 d每组随机选取3只山羊采集瘤胃液样品50 mL/只,立即对纤毛虫总数计数,再提取样品总DNA,设计引物扩增18S rDNA V4区,扩增产物采用Miseq平台测序,并通过荧光定量PCR比较8种常见瘤胃纤毛虫数量的变化。试验结果:（1）每个样品中纤毛虫优势种属均为多加多泡双毛属Polyplastron（40.07%65.59%）与头毛属Ophryoscolex（9.9%52.09%）。（2）Alpha多样性指数,各组间均无显著差异,但I、II组间,III、IV组间比较,II、IV组在数值上更高,且60天时更明显;III组各指数均低于I组。（3）在属水平上,II组与I组、IV组与III组比,头毛属相对含量增加,多甲多泡双毛属、内毛属与均毛属相对含量降低,但仅I、II组间差异显著（P<0.05）,III、IV组间差异不显著（P>0.05）;III组与I组相比,多甲多泡双毛属,均毛属与头毛属均无显著变化（P>0.05）;II与IV组相比,多加多泡双毛属显著增加（P<0.05）,头毛属显著降低（P<0.05）。（4）各组各时间点纤毛虫总数均无显著变化（P>0.05）;II组与I组、IV组与III组比,II、IV组尾刺头毛虫的数量极显著增加（P<0.01）;尾刺内毛虫数量III组极显著高于I组（P<0.01）。随试验期延长,各组原口均毛虫数量逐渐增加,邻近腹甲双毛虫数量逐渐减少,Polyplastron multivesiculatum与浦氏头毛虫数量仅Ⅰ、Ⅱ组逐渐增加,尾刺头毛虫数量仅在Ⅱ、Ⅳ组逐渐增加,尾刺内毛虫与简单内毛虫仅在Ⅲ、Ⅳ组中逐渐增加。结论:山羊精料中添加3 g·d-1·goat-1“态康利保”可增加头毛属相对含量,降低多甲多泡双毛属、内毛属和均毛属相对含量,但添加双倍精料时影响更弱。在两种精料水平下添加“态康利保”均显著提高尾刺头毛虫数量。而头毛属及尾刺头毛虫与瘤胃消化降解纤维息息相关,因此复合抗菌肽“态康利保”可促进部分降解纤维的纤毛虫种属的生长来提高山羊生长性能。双倍精料对纤毛虫种群结构的影响无统计学意义,但尾刺内毛虫的数量显著增加。添加“态康利保”可增强精料量变化对纤毛虫种群结构的影响,进一步降低某些有关纤维降解的种属的相对含量。