论文部分内容阅读
子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，主要是以高血压和蛋白尿为特点，其发病根源在于胎盘，严重威胁产妇和围产儿的生命[1]。子痫前期作为一种产科常见的并发症，其发生机制尚未明确。目前多数研究表明，滋养细胞分化、凋亡异常导致其细胞功能障碍，继而使得滋养细胞浸润性与螺旋动脉重铸发生改变，最终导致子痫前期的发生。由此可见滋养细胞功能障碍是PE发生的重要原因。近年来人们发现微小RNA(microRNA，miRNA)在细胞的增殖、凋亡、细胞分化等生物学过程有着重要的调节作用，我科前期研究发现，PE胎盘组织中存在一系列表达失衡的miRNA~[2]，其中miR-18b子痫前期胎盘中的表达显著下降，推测miR-18b分子可能参与了子痫前期的病理生理过程。miR-18b是一段20－24nt的非编码单链miRNA分子，通过影响mRNAs的稳定性和翻译来参与基因调控，目前已在许多组织中发现其对细胞功能有着重要的调控作用，如研究发现，无淋巴结转移的结肠癌组织中miR-18b呈病理性高表达[3]。通过Targetscan、DIANA-microT软件对hsa-miR-18b的靶基因进行预测，结果显示PE相关分子ERα为miR-18b的靶基因之一。ERα通过结合雌激素发挥其生物学效应，而对雌激素的研究表明，雌激素对胚胎干细胞的植入与滋养细胞的分化、凋亡浸润都有重要的影响。本实验室杨阳等通过免疫组化技术发现PE患者的胎盘组织内ERα的表达量是失衡的[4]。深入了解PE患者中miR-18b的表达特点，有助于了解子痫前期的发病机制，并为其治疗提供实验依据。本实验拟通过实时定量荧光PCR技术验证我科前期芯片结果，检测miR-18b在PE患者胎盘组织中是否表达异常，并在HTR-8细胞内通过细胞转染技术过表达pre-miR-18b，检测过表达miR-18b后细胞中ERα的变化，验证miR-18b与ERα是否具有相关性。目的1检测子痫前期患者胎盘组织中miR-18b与正常妊娠胎盘组织中的差异性。2在HTR-8细胞内验证miR-18b与ERα是否具有相关性。方法1收集临床上子痫前期患者和正常妊娠孕妇的胎盘组织，提取胎盘组织中的RNA，采用实时定量PCR(real-time PCR)检测子痫前期患者与正常孕妇胎盘组织中miR-18b的表达量。2在HTR-8内转染pre-miR-18b mimics与miR-18b inhibitor分子分别促进与抑制miR-18b的表达后，通过RT-PCR与免疫印迹技术检测ERα的mRNA与蛋白的改变来验证miR-18b与ERα是否具有相关性。结果1实时定量结果显示子痫前期患者中miR-18b的表达量与正常孕妇相比，表达量下降，为正常孕妇的0.63倍，与我科前期基因芯片筛选结果相符。2在HTR-8细胞内促进与抑制miR-18b的表达后，通过RT-PCR检测ERα的mRNA的表达量，结果显示过表达组、抑制组与对照组的相对量之间无明显的差异性，结果无统计学意义（P>0.05）。3在HTR-8细胞内促进与抑制miR-18b的表达，通过western-blot检测ERα蛋白的表达量，结果显示过表达组、抑制组与对照组的相对量之间无明显的差异性，结果无统计学意义（P>0.05）。结论1同正常妊娠孕妇比较，子痫前期患者胎盘组织中的miR-18b表达量下降，可能参与了子痫前期的发生发展过程。2miR-18b可能对ERα的表达量无明显的调节作用。