洛铂对人宫颈癌CaSki细胞生长影响的机制研究

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目的:探讨洛铂对宫颈癌 CaSki细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响以及洛铂作用宫颈癌细胞前后蛋白质组的变化。  方法:1.体外培养CaSki细胞,取对数生长期的宫颈癌CaSki细胞,分为阴性对照组和实验组(加入不同浓度洛铂:2、4、6、8、12、16、24和32μg/ml),作用24、48、72小时,进行MTT实验。  2.取对数生长期的宫颈癌CaSki细胞,分为阴性对照组和实验组(加入不同浓度洛铂:2、6和12μg/ml),作用24、48、72小时,倒置显微镜观察细胞的形态学改变,流式细胞技术检测洛铂对宫颈癌细胞的细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导作用。  3.6?g/ml洛铂作用细胞48h,分别收集洛铂处理组与对照组细胞,提取细胞总蛋白并运用双向凝胶电泳技术分离蛋白质,PDOuest软件分析洛铂处理前后差异表达的蛋白质,选取明显表达差异在两倍以上的11个蛋白质斑点,运用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术分析鉴定蛋白质样品。  结果1.洛铂能够抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖,呈浓度和时间依赖。  2.洛铂能够诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡,呈浓度和时间依赖;倒置显微镜下可见明显的凋亡形态学改变,流式细胞检测示洛铂低浓度短时间作用使细胞周期阻滞在S期,高浓度长时间作用使细胞周期阻滞在G0/G1期。  3.经双向凝胶电泳和液相色谱-串联质谱分析后,成功鉴定了11个蛋白质,包括泛素羧基末端水解酶16、不均一核糖核蛋白 A2/B1、多聚嘧啶结合蛋白、核糖磷酸焦磷酸激酶等。  结论:洛铂能显著抑制宫颈癌 CaSki细胞增殖,诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞。并引起细胞蛋白质组的改变,部分差异表达蛋白可能与洛铂的抗肿瘤作用有关。
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