胰岛素样生长因子-1对高氧诱导的A549细胞抗凋亡机制研究

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fxlilac
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目的:  1、研究IGF-1对高氧诱导的A549细胞周期的影响。  2、研究IGF-1对A549细胞凋亡及Bax、Bcl-2及caspase-3表达的影响。  方法:  l、A549细胞株传代培养。  2、分组:Ⅰ组:正常组,Ⅱ组:高氧组,Ⅲ组:高氧+IGF-1低剂量组,Ⅳ组:高氧+IGF-1中剂量组,Ⅴ组:高氧+IGF-1高剂量组等5组。  3、A549细胞高氧处理及药物干预:放入CO2恒温细胞培养箱内培养,倒置显微镜下观察各组细胞动态生长状况,待细胞融合至40-50%时,进行IGF-1药物干预。  (1)Ⅱ组(高氧组):细胞用含10%胎牛血清的1640培养液放入氧浓度85%的封闭箱内放入5%CO2、37℃细胞培养箱内培养48h;  (2)药物干预组:将Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组细胞用不同剂量IGF-1处理,与高氧组一同放入氧浓度85%封闭箱内,再放入5%CO2、37℃细胞培养箱内培养48h;  (3)Ⅰ组(正常组):细胞用含10%胎牛血清的1640培养液放入5%CO2、37℃培养箱内培养。  4、观察指标:①采用MTT法检测细胞存活率;  ②采用流式细胞仪分析细胞周期;  ③HE染色观察细胞的凋亡情况;  ④采用流式细胞仪AnnexinⅤ-PI荧光双染法检测细胞的凋亡;  ⑤免疫细胞化学的方法检测Caspase-3的表达变化。  ⑥采用流式细胞仪检测bax、bcl-2表达的水平。  5、统计学资料处理方法:  计量资料用均数士标准差(x士s)来表示,应用 SPSS17.0统计学软件进行统计学分析,各组数据资料服从近似正态分布,组间比较利用单因素方差分析。P<0.05表明有显著性的差异,具有统计学的意义。  结果:  1、细胞存活率测定:与Ⅰ组相比,Ⅱ组A549细胞的存活率明显降低,差异有显著性意义(P<0.05);与Ⅱ组相比,Ⅲ组OD值无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05);而Ⅳ、Ⅴ组OD值随着IGF-l药物浓度的递增逐渐增大,细胞存活率逐渐升高,与Ⅱ组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。  2、细胞周期分析:与Ⅰ组相比,Ⅱ组A549细胞S、G2-M期的细胞百分比下降,差异均有显著性意义(P0.05),但是S期细胞百分比在不同剂量IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性效应。  3、流式细胞仪检测细胞凋亡:利用AnnexinⅤ-PI双染法检测细胞凋亡,结果Ⅱ组凋亡率较Ⅰ组明显增多,差异有显著性意义(P
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目的:检测延边地区朝鲜族急性脑梗死患者hs-CRP、Hcy、D-D的水平,探讨其在脑梗死诊治中的临床意义  方法:选择2009年1月至2010年12月在延边大学附属医院神经内科住院的首次