生殖细胞标记基因是一类指示、追踪生殖细胞相关生理活动的基因,被广泛用于性腺发生、配子发生和原生殖细胞的起源、迁移、分化等方面的研究。而且对于分离生殖细胞进行体外培养及移植,为濒临灭绝的物种借助近缘物种进行生殖繁衍保护也提供了有用的工具。本实验通过同源克隆的策略,成功克隆出黑脊倒刺鲃中关于生殖细胞早期发育阶段的标记基因Sc-vasa, Sc-nanos以及与生殖细胞减数分裂Ⅰ相关的基因Sc-scp3: Sc-vasa基因开放阅读框的全长1962 bp,其编码654个氨基酸。经比对发现,黑脊倒刺鲃Vasa蛋白与银鲫、金鱼、草鱼、虹鳟鱼、金枪鱼、斑马鱼、罗非鱼和黄鳝的Vasa蛋白相似度分别为90%、89%、86%、79%、79%、77%、77%、74%;Sc-nanos基因开放阅读框的全长456 bp,其编码125个氨基酸。经比对发现,黑脊倒刺鲃Nanos蛋白与鲤鱼、斑马鱼、紫色球海胆、家蚕和大熊猫的Nanos蛋白的相似度分别为81%、63%、52%、50%、44%;Sc-scp3基因部分开放阅读框的全长序列477 bp,其编码159个氨基酸。经比对发现,黑脊倒刺鲃Scp3蛋白与斑马鱼、虹鳟鱼、非洲爪蟾、牛、人和小鼠的Scp3蛋白相似度分别为93%、84%、72%、69%、66%、65%。半定量RT-PCR分析显示,Sc-vasa、Sc-nanos和Sc-scp3三种基因仅在黑脊倒刺鳃成鱼的性腺组织中特异的表达。RNA原位杂交结果表明：在精子发生中,Sc-vasa mRNA、Sc-nanos mRNA和Sc-scp3 mRNA表达结果较为相似,均是在精原细胞和初级精母细胞中表达,而在后期中未发现表达。在卵子发生中,Sc-vasa mRNA、Sc-nanos mRNA和Sc-scp3 mRNA在卵原细胞和卵母细胞的各个时相中均有表达。并且在卵原细胞和前期的卵母细胞中表达强烈,而在后期时相的卵母细胞中阳性信号逐渐减弱,且向细胞边缘聚集。