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万年蒿是在吉林省延边地区有着广泛应用基础的一个朝药,为菊科蒿属植物万年蒿 Artemisia sacrorum Ledeb.的干燥地上部分,功能健脾利湿,退黄。可单用,也可配伍使用。在延边地区应用万年蒿膏剂,预防和治疗各种急慢性肝炎,有悠久的应用历史。在治疗黄疸、胁痛等肝炎症状时,老百姓愿意选用万年蒿作为首选药物。 本研究在多年的肝保护动物实验基础上,筛选出万年蒿肝保护有效部位ASE,并对其进行了作用机理研究。结果表明,在施用APAP之前预先对小鼠灌服ASE,能够明显抑制血清中冬氨酸转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT),肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,抑制小鼠肝组织中谷胱甘肽(GSH)消耗,丙二醛(MDA)蓄积。另外,如肝脏组织病理学分析和DNA fragmentation analysis所示,ASE预防APAP所致细胞凋亡和坏死。还有,根据蛋白质印迹分析结果,ASE显著减少APAP所致小鼠肝脏中caspase-3和-8的蛋白质表达。以上结果提示,ASE对APAP所致小鼠肝损伤的保护作用可能和其抑制脂质过氧化作用和TNF-α调节的细胞凋亡有关。 因为脂肪肝和肝损伤有着密切的联系,本实验研究了对肝脏脂质蓄积有缓解作用的有效部位及其作用机理。结果表明,当用95%EE处理HepG2细胞时,观察到甘油三酯含量的显著减少及AMPK和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化的明显增加。95%EE抑制了脂肪生成的基因表达SREBP1c和其靶基因诸如脂肪酸合酶(FAS),硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1),并呈现时间和剂量依赖性。另一方面,脂肪分解基因表达,诸如过氧物酶体增殖子激活受体α(PPAR-α)和CD36增加了,并呈现时间和剂量依赖性。而当用AMPK抑制剂compound C进行预处理后,这些效果受到明显抑制。然而,SREBP2,低密度脂肪蛋白受体(LDLR),β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的基因表达没有显著差异。同时,95% EE明显增加脂肪酰辅酶 A(ACOX)的基因表达,并呈现时间和剂量依赖性。这些结果表明,95%EE通过激活 AMPK减缓肝脏脂肪蓄积,有可能在预防、治疗脂肪肝,肥胖症,二型糖尿病等疾病过程中起到积极作用。 根据文献报道,很多蒿类植物,诸如Artemisia anomala奇蒿,青蒿Artemisiaannua等,具有潜在的抗肿瘤作用。其中,对青蒿的研究最多而且成果也最显著。体内外实验表明,青蒿素及其衍生物对人体外肿瘤细胞和多种动物体内肿瘤模型具有抑制作用。多项研究表明青蒿素及其衍生物与传统化疗药无交叉耐药,且可逆转耐药,有望成为新的广谱、高效、低毒的抗癌药物。万年蒿与青蒿同属蒿类植物,含有许多结构相似的化学成分如萜类、香豆素及黄酮类等,有可能对癌细胞具有细胞毒性作用。为了进一步探索万年蒿的抗肿瘤作用,采用3种人肿瘤细胞株:肝癌细胞株(HepG2),结肠癌细胞株(HT-29)、乳腺癌细胞株(MCF-7),和一种正常人肾细胞株(HEK293细胞),对万年蒿的乙醇提取物、正丁醇提取物等9个部位进行了体外抗肿瘤有效部位筛选实验。体外细胞实验结果表明,其中的二氯甲烷提取物对HepG2,HT-29、MCF-748小时 EC50值分别为122.35,49.56和28.51μg/ml,显示了最强的细胞毒性。另一方面,二氯甲烷提取物对正常人肾细胞株(HEK293细胞)的8小时 EC50值只有150.20μg/mL,远远低于对HT-29、MCF-7的EC50值,显示了较好的选择性。 在探索万年蒿抗肝损伤和抗癌有效部位作用机理的同时,我们对万年蒿这两个有效部位的化学成分进行了提取、分离及鉴定。 其中,我们从二氯甲烷抗癌活性部位中共分离得到6个单体化合物,经鉴定,分别为:异东莨菪素(1),东莨菪素(2),β-谷甾醇(3),香豆素(4),芜花素(5),金合欢素(6)。有文献报道,其中的异东莨菪素,芜花素,金合欢素和东莨菪素通过抑制细胞繁殖,引起细胞凋亡,抑制相关基因表达等多种机理,能够不同程度地对肺癌、结肠癌、胃癌等各种人癌细胞有抑制作用,在预防癌症转移、治疗癌症等诸方面具有潜在的应用价值。因此,有必要对这几个化合物进行进一步的药效学及作用机理研究。 还有,我们从抗肝损伤有效部位ASE中分离得到3个单体化合物,根据理化性质、以及1H-NMR,13C-NMR,DEPT、HMBC,HSQC、1H-1H COSY、NOESY等现代波谱学方法分析鉴定,分别确定为:东莨菪素(I),对羟基苯乙酮(II),1,2-苯二甲酸-双-2-甲基庚酯(III)。