目的： 研究银杏叶提取物(舒血宁)对体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞(Ast)细胞增殖周期的影响，为银杏叶提取物(舒血宁)治疗中枢神经系统疾病提供理论依据。 方法： 1.体外培养、纯化大鼠脑皮质Ast酶消化和机械分离方法获得大鼠脑皮质细胞，采用差速粘附处理、恒温摇床振荡等方法纯化星形胶质细胞进行培养，经GFAP免疫细胞化学染色鉴定确认培养物为星形胶质细胞。星形胶质细胞的纯化培养及形态学观察：新生Wistar大鼠取大脑皮质，用胰酶消化结合机械吹打方法分离皮质细胞制成初细胞悬液，差速贴壁法去除成纤维细胞，培养至细胞融合并分层生长时，采用恒温摇床振荡方法去除神经元、少突胶质细胞、小胶质细胞等后继续培养。在倒置相差显微镜下观察不同培养时间的细胞的密度、突起长度及分支情况等以了解细胞的生长状态并进行一定的体视学测量。 2.通过GFAP-FITC免疫荧光法鉴定星形胶质细胞。 3.MTT比色法选择舒血宁作用浓度分对照组和舒血宁处理组，对照组仅加5％FCS培养基，舒血宁处理组分为10-8ul/L、10-7ul/L、10-6ul/L三个浓度的舒血宁。 4.实验分组：培养的Ast随机分成4组，10-8ul/L舒血宁50 ul加入各组培养液，分别作用0 h、6 h、12 h、24 h。 5.利用流式细胞仪(FCM)分析技术检测细胞周期。 结果： 1.培养细胞的生长规律：分离的大鼠脑皮质细胞在接种后1 h开始贴壁，6～8 h后大部分细胞已贴壁，呈椭圆形、梭形及不规则形，部分细胞已开始铺展，并长出胞突。随着培养时间的延长，细胞数量增多、体积增大，突起延长并且突起数目增加，3～5 d时增加最明显。培养7～10 d后，细胞融合并可见分层生长，星形胶质细胞在底层，神经元、少突胶质细胞、小胶质细胞等其它细胞在上层。 2.纯化：根据细胞分层生长的特性，采用摇床振荡处理后，显微镜下观察可见细胞形态较一致，胞体轮廓清晰，一级胞突丰富，分支多，相互交织成网状。 3.鉴定：纯化后的细胞经GFAP通过GFAP-FITC免疫荧光法染色后，阳性细胞胞浆及突起均呈红色，星形胶质细胞纯度可达98％以上，可用于后续实验。 4.MTT比色法选择舒血宁作用浓度：各组间的吸光度值差别有统计学意义。不仅舒血宁浓度组较对照组差异显著，而且舒血宁各浓度组间差值具有统计学意义，根据以上结果及相关的资料，10-7ul/L的舒血宁即可以刺激细胞的增殖，因此选择该浓度作为本课题中舒血宁的作用浓度。 5.舒血宁对Ast细胞周期的影响：G0/G1期方差分析结果： 6 h组、12 h组和24 h组均低于0h组，24 h组高于6 h组和12 h组，12 h组低于6 h组。 S期方差分析结果：12 h组和24 h组低于0h和6 h组。 G2/M期方差分析结果：6 h组、12 h组和24 h组均高于0 h组。 增殖指数(PI)方差分析结果：6 h组、12 h组和24 h组均高于0 h组，24 h组低于6 h组和12 h组，12 h组高于6 h组。 结论： 1.舒血宁可通过影响Ast细胞周期来促进Ast增殖。 2.5×10-7ul/L的舒血宁即可以刺激Ast的增殖。