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研究背景:肝癌常见在亚洲东部且发病率和致死率均不容乐观,病毒感染是其发病主要原因之一。近年来,因为我国普及婴幼儿接种乙型肝炎和丙型肝炎疫苗,肝癌在年轻患者中的死亡率有明显下降,但老年患者的情况没有出现明显改善。在肝癌的临床治疗中手术疗法仍旧是首选策略,但术后常发生肿瘤转移,且很多病人往往在癌症晚期阶段才被确诊,错失了最佳治疗时间,所以肝癌的早期诊断和靶向治疗显得尤为重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是转录本大于200 nt且不能编码蛋白质的RNA,近年来发现可以通过充当“分子海绵”、“诱饵”、“信号”和“分子支架”等参与机体生长发育,甚至是疾病的发生发展,尤其在肿瘤的增殖、侵袭迁移、血管形成和自噬等过程中扮演了重要角色。目前有少量文献报道了lncRNAAK001796在肝癌中的高表达现象,但AK001796在肝癌中潜在的分子作用机制还尚不清楚。研究材料与方法:本研究通过对TCGA数据库上传的肝癌/癌旁组织lncRNA测序数据分析,筛选出在肝癌组织中高表达的lncRNA AK001796,并分析其表达量与TCGA数据库中患者的临床特征的关系,通过GSEA分析AK001796表达量与基因富集情况;利用qPCR检测在HCC细胞系和肝癌临床cDNA芯片中AK001796的表达量;在HCC细胞系中沉默AK001796后通过CCK8、克隆形成和细胞周期凋亡检测研究其对HCC细胞增殖的影响;通过网站预测AK001796可能结合的microRNA并通过qPCR和双荧光素酶报告基因实验进行验证;通过网站预测并结合已发表文献,利用功能损失/获得的方法来对肝癌增殖中的AK001796/miR-150/GAB1轴进行功能验证;通过western blot验证在HCC细胞中沉默AK001796对下游ERK和AKT磷酸化的影响。在体内水平构建裸鼠肝癌皮下移植瘤,通过对瘤体体积重量测量,qPCR和免疫组化检测瘤体中AK001796表达量和Ki-67变化,确定AK001796在体内水平对增殖的影响。研究结果:通过TCGA数据库上传的肝癌/癌旁组织lncRNA测序数据分析,我们一共筛选出58个lncRNA数据。其中39个lncRNA在肝癌中上调,其余19个下调。结合临床特征分析及相关文献,我们挑选出AK001796进行后续研究。体外实验中,qPCR实验证明AK001796在HCC细胞系HepG2和SMMC-7721中比在肝正常细胞系L02中表达增加;在HCC细胞系中沉默AK001796后一系列细胞增殖功能实验证明沉默AK001796后HCC细胞增殖能力下降。通过生信预测AK001796结合miR-150的潜在位点,qPCR检测发现AK001796和miR-150互相负调控,且双荧光素酶报告基因证明AK001796和miR-150靶向结合。通过生信预测并结合已发表文献发现GAB1和AK001796与miR-150结合位点相同,通过qPCR和western blot发现AK001796和GAB1正相关,将含有AK001796与miR-150结合位点和突变结合位点的表达质粒转染HCC细胞系,发现AK001796通过竞争性结合miR-150间接调控GAB1表达。通过功能损失/获得实验,验证AK001796通过miR-150/GAB1轴调控HCC细胞增殖。在HCC细胞中沉默AK001796,蛋白印迹证明沉默AK001796后可以抑制GAB1下游ERK和AKT磷酸化的激活。体内实验中抑制AK001796的实验组瘤体体积和重量均比正常表达AK001796的对照组低,且Ki-67表现阴性。研究结论:1.LncRNAAK001796在肝癌中高表达。2.LncRNAAK001796促进肝癌细胞增殖。3.LncRNA AK001796通过结合miR-150促进GAB1表达进而促进ERK和AKT磷酸化。