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目的本研究以人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4为研究对象,探讨青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞凋亡的影响。通过检测青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞的增殖、周期、凋亡、线粒体膜电位、线粒体内活性氧、相关mRNA以及相关蛋白的影响,探讨青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用能否通过激活人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的线粒体凋亡途径而诱导细胞凋亡。方法1.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞的增殖抑制作用噻唑蓝法检测青蒿琥酯以及三氧化二砷单独与联合作用于NB4细胞后,对NB4细胞增殖的影响并计算其半数抑制浓度。2.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞周期及凋亡的影响流式细胞术检测青蒿琥酯以及三氧化二砷单独与联合作用于NB4细胞后,对NB4细胞周期及凋亡的影响。3.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞线粒体膜电位的影响JC-1法检测青蒿琥酯以及三氧化二砷单独与联合作用于NB4细胞后,对NB4细胞线粒体膜电位的影响。4.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞线粒体内活性氧的影响MitoSOX法检测青蒿琥酯以及三氧化二砷单独与联合作用于NB4细胞后,对NB4细胞线粒体内活性氧物质的影响。5.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞的相关mRNA影响qRT-PCR检测青蒿琥酯以及三氧化二砷单独与联合作用于NB4细胞后,对NB4细胞Bax与Bcl-2的mRNA转录影响。6.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞的相关蛋白影响Western blot检测青蒿琥酯以及三氧化二砷单独与联合作用于NB4细胞后,对 NB4 细胞 Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 以及 Cyt-C 蛋白表达的影响。结果1.青蒿琥醋与三氧化二砷联合应用对NB4细胞的增殖抑制作用青蒿琥酯以及三氧化二砷单独作用于NB4细胞后,与对照组比较,具有明显的增殖抑制作用并具有浓度依赖性(P<0.05),联合用药后较各自单用药的效果更加明显(P<0.05)。2.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用影响NB4细胞周期和凋亡的情况青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用作用于NB4细胞后,与对照组相比,细胞G0-G1期比例明显升高(P<0.05),细胞凋亡比例与对照组比较明显升高(P<0.05)。3.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用影响NB4细胞线粒体膜电位的情况青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用作用于NB4细胞后,与对照组比较,细胞线粒体膜电位的表达明显下降(P<0.05)。4.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞线粒体内活性氧的影响青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用作用于NB4细胞后,与对照组比较,细胞线粒体内活性氧物质的含量明显升高(P<0.05)。5.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用影响NB4细胞有关mRNA的情况青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用作用于NB4细胞后,与对照组比较,NB4细胞内Bcl-2 mRNA的转录明显下降(P<0.05),Bax的mRNA的转录明显升高(P<0.05)。6.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用影响NB4细胞有关蛋白的情况青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用作用于NB4细胞后,与对照组相比,NB4细胞内Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax、Caspase-3、Caspase-9以及Cyt-C蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论1.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用对NB4细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡,具有一定的体外抑制急性早幼粒细胞白血病细胞的作用。2.将细胞周期阻滞于G0-G1期是青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用抑制细胞增殖的可能作用机制之一。3.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用诱导NB4细胞凋亡的作用机制可能是通过激活线粒体凋亡信号通路而诱导细胞凋亡。4.青蒿琥酯与三氧化二砷联合应用作用NB4,使线粒体内ROS浓度的升高、Bcl-2蛋白表达的下调、Bax蛋白表达的上调,可能与NB4线粒体凋亡通路的调节因素有关。