口蹄疫（Foot and Mouth Disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的以感染偶蹄兽为主的急性、热性、高度接触传染性疫病。该病的发生严重地限制易感动物的国际贸易，近几年我国局部口蹄疫疫情严重，给畜牧业带来较大的经济损失。因此，防控和监测口蹄疫疫情由为重要，如何快速鉴别自然感染与疫苗免疫动物是防控口蹄疫的重要部分。本研究对本实验室筛选鉴定出的1株Asia1型口蹄疫病毒非结构蛋白3A上的2个B细胞线性表位进行加工修饰成一条短肽，之后与非结构蛋白3B上的一段合成短肽进行反复串联，并在大肠杆菌中表达出5种不同的重组蛋白，表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析证明，这5种蛋白都可以与口蹄阳性血清反应，从中选出1个抗原性最强的目的蛋白做Western blot分析证实，此抗原可以与3种口蹄疫血清型牛阳性血清发生良好的特异性反应，并将其作为包被抗原，建立一种间接ELISA检测方法来对牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体进行检测来区别自然感染牛和疫苗免疫牛。使用本ELISA方法检测了184份已知阴性牛血清，以“阴性血清对照均值+3SD”作为临界值判定标准，即S/P>0.31为阳性，并设定了可疑区间：阴性血清对照均值+2SD〈可疑区间〈阴性血清对照均值+3SD即：0.23≤S/P≤0.31；S/P<0.23为阴性。用建立的方法检测40份已知口蹄疫阳性血清，检出率为100%，说明本方法的敏感性为100%；对常见的4种牛病阳性血清进行特异性交叉试验，检测结果表明该ELISA检测方法不4种阳性血清发生反应，具有较好的特异性，同时重复性试验的批内、批间变异系数均小于10%。通过比较发现本ELISA与Ceditest竞争ELISA试剂盒的符合率最高为96.25%；与兰兽研3ABC间接ELISA试剂盒次之，为93.48%；与世纪元亨阻断ELISA的符合率为84.35%，最低。利用本方法对不同地区的5个奶牛养殖场的829份血清样本进行检测，阳性率从8.02%到47.75%不等。r3AB-ELISA的建立可用于口蹄疫的鉴别诊断，为FMD的综合防控提供了技术支持和物质基础。本研究以血清学ELISA的(2BF2AF)2抗原作为检测抗原为基础建立了检测奶液的奶液间接ELISA方法，并确立了临界值标准：S/P≥0.2为阳性，S/P≤0.2为阴性。以兰兽研3ABC间接ELISA试剂盒检测血清为参考标准，用奶液ELISA检测对应奶液，符合率为86.36%，利用本奶液ELISA方法对不同地区的3个奶牛养殖场的522份奶液样本进行检测，阳性率在10%-16.58%之间；对混合奶液的监测作了初步的探索，可检测出16份阴性奶液中的1份弱阳性奶液样本，为牛口蹄疫疫情的群体监测提供了理论基础。