白桦BpFLC基因的克隆及遗传转化

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开花植物从营养生长向生殖生长的转变是由内因和外因共同作用的结果。FLC是抑制花期转变的关键因子,是多种调控途径的作用因子。本文从白桦中分离出FLC基因,命名为BpFLCo对其进行初步研究,主要结果如下:1.从白桦叶片中的cDNA库中分离BpFLC基因,其全长为1304bp,开放读码框为627bp,共编码208个氨基酸,推测其分子量为50.419kD,等电点为5.17。2.通过实时荧光定量PCR的方法,对BpFLC基因在不同器官中的表达模式进行了分析。结果表明,BpFLC基因在不同的组织中均有表达,其中以茎尖和幼叶的表达较高,老叶和根中次之,茎段最低。3.构建了白桦BpFLC基因的亚细胞定位融合蛋白载体GFP-BpFLC,并将此载体转化至洋葱细胞中进行瞬时表达。结果表明,BpFLC基因定位于细胞核和细胞质。4.应用染色体步移技术获得BpFLC基因启动子,其全长为1647bp,具有启动子序列的典型特征,如TATA-box、CAAT-box等,还含有一些重要的与开花相关的功能元件,如:WRKY71OS和GARE。5.构建了植物表达载体pROK Ⅱ-BpFLC,并经农杆菌介导进行白桦遗传转化。通过PCR、Q-PCR、Nouthern杂交鉴定表明,BpFLC基因已经整合到白桦基因组中,且转基因植株的表达量远远高于野生型植株。6.将植物表达载体pROKⅡ-BpFLC用浸花法对拟南芥进行遗传转化。通过PCR、RT-PCR、Nouthern杂交鉴定表明,BpFLC基因已经整合到拟南芥基因组中,并在转录水平正常表达。Q-PCR结果表明,在转基因植株中,某些与开花相关的基因表达量下将,如FT, FD, SOC1和AP1。
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