尼龙6膜固定化生物催化剂及其应用

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尼龙6 (PA 6)膜为耐水、有机溶剂和溶胀的高分子聚酰胺膜,具有良好孔径分布及机械强度,来源广,价格便宜。由于其末端氨基较少,对蛋白质有强烈的非特异性吸附,成为非常有前途的细胞和酶固定化载体。壳聚糖是甲壳素经脱乙酰化反应而得到的一种生物高分子,由于其无毒、可生物降解和良好的生物相溶性等优良特性。已在功能材料包括生物材料等方面得到广泛应用。但由于壳聚糖只能溶于酸性水溶液,难溶于水,在很大程度上限制了它的应用。所以水溶性壳聚糖衍生物的研制正成为一个新的研究方向。手性2-辛醇常被用于精细有机合成、香料和某些特种材料。它是制备高性能液晶和液晶器件的重要手性材料同时它也是合成类固醇、维生素E和昆虫性外激素(生物杀虫剂)等许多光学活性药物和农药的重要中间体。论文考察了在浸润条件下,戊二醛交联的PA 6膜固定化木瓜蛋白酶。对固定化条件进行了优化。结果表明,4℃、pH 6.0条件下,将膜载体浸润于2 mg/mL酶液中5 h,固定化酶活为303.4 U/g。固定化酶最适反应pH和反应温度分别为6.0~7.0和65℃。其pH稳定性、热稳定性均高于游离酶。从热力学和动力学角度探讨了吸附机理,其等温吸附过程符合Freundlich和Langmuir模型,288 K、pH 6.0时,PA 6膜对木瓜蛋白酶的饱和吸附量为1.692 mg/g。动力学吸附过程符合准二级动力学方程。以PA 6膜固定化木瓜蛋白酶降解壳聚糖。探讨了温度、pH、底物浓度和时间对酶降解壳聚糖的影响,2.5 h时即可得到分子量小于4万的壳寡糖。该酶降解的最适温度、pH和底物浓度分别为50℃、pH 5.0和0.1 g/mL。同时研究了辐照剂量对壳聚糖降解的影响,并对辐照前后壳聚糖的结构进行了表征。UV、FTIR分析表明,辐照后除壳聚糖分子生成羰基外,壳聚糖主链结构未见变化,脱乙酰度也没有显著改变,显示出辐射降解是一种有效的控制壳聚糖分子量方法。选用2-辛酮为模型底物,用PA 6膜吸附法对增殖培养的面包酵母进行了固定化。研究表明:蔗糖是最佳辅助底物,二氯甲烷是最佳有机相,当采用300 mmol/L的Tris-HCl缓冲液、60 mmoL/L的蔗糖、二氯甲烷与缓冲液体积比5/30,2-辛酮转化率>80%,e.e.值为97%。
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