香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺组织中Derlin-1的表达

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目的:初步研究香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织中Derlin-1的表达。方法:研究分动物实验,细胞实验两部分1.动物实验部分:采用本实验室复制的香烟烟雾诱导的大鼠COPD模型标本,动物分为4个组,分别为对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组和戒烟组(吸烟4个月然后戒烟1个月),收集对照组和各实验组大鼠肺组织标本,采用逆转录-PCR(RT-PCR)方法检测Derlin-1mRNA表达水平,并采用Western-blot、免疫组织化学方法检测Derlin-1蛋白质表达水平。2.采用本实验室保存的分离大鼠AECII细胞进行原代培养并传代至第三代用于实验,用10%CSE对AECII细胞分别处理0h、3h、6h、12h、24h、48h并收集细胞采用RT-PCR、Western blot技术检测Derlin-1的表达。结果:1.动物试验部分结果(1)肺组织病理学结果:大鼠肺组织结构在对照组大致正常;2个月吸烟组大鼠肺结构出现紊乱现象,部分肺泡结构破裂;吸烟4个月组大鼠肺结构紊乱现象更加明显,肺泡壁破裂较重,肺泡腔扩大;戒烟组大鼠肺泡的破坏有所缓解,但与吸烟4个月组无显著改变。(2)免疫组化结果显示Derlin-1主要定位于肺泡上皮细胞,血管内皮细胞,支气管上皮细胞的胞浆中,在吸烟2个月大鼠表达最高,戒烟组大鼠次之,吸烟4个月组表达较戒烟组大鼠明显降低,而对照组表达最低,P均<0.05。RT-PCR和Western blot检测结果与免疫组化一致。2细胞试验部分结果(1)Western blot结果显示:在AECII中,用10%CSE作用不同时间Derlin-1蛋白的表达:Derlin-1的表达随着CSE暴露时间的延长呈先递增后逐渐下降的趋势,在6h组达到高峰。随后逐渐降低但仍高于对照组水平。RT-PCR的结果与Western blot结果一致。结论:1.随着香烟烟雾暴露时间的延长,肺组织中内质网相关降解蛋白Derlin-1的表达呈规律改变。2. Derlin-1可能参与慢性阻塞性肺疾病的发生发展。
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