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慢性根尖周炎是一种以厌氧菌感染为主的混合感染性疾病,其主要感染菌为具核梭杆菌和Solobaccterium moorei等。慢性根尖周炎破坏根尖周的牙槽骨或形成肉芽肿,具有容易复发、难以根治的特点,给人们的生活和工作带来诸多不便和麻烦。 目前,治疗慢性根尖周炎主要通过常规根管治疗的方法,但该法操作繁琐、价格昂贵且治疗不彻底。因此寻找一种更为安全、有效的方法变得非常重要。近年来人们发现,利用IgY技术产生的抗特定病菌的抗体,能够治疗由致病菌感染引起的疾病,并且具有安全无残留、价格便宜等优点,具有很大的开发前景。 本研究以灭活的具核梭杆菌、Solobaccterium moorei和两种菌的混合菌分别作为免疫原,免疫产蛋母鸡,共免疫五次。先用两步PEG6000沉淀法提取得到IgY粗品,再用硫酸铵盐析法纯化制得IgY纯品。然后用考马斯亮蓝染色法检测蛋白含量,用SDS-PAGE凝胶电泳法检测抗体分子量及纯度,用间接酶联免疫吸附法检测抗体效价和交叉反应,用免疫印迹法和间接荧光免疫分析法检测抗原抗体的特异性结合,并对IgY的热稳定性、酸碱稳定性、反复冻融稳定性以及对消化酶的稳定性进行了研究,最后研究了特异性IgY的抑菌活性以及交叉抑菌活性。 实验结果显示抗具核梭杆菌IgY、抗Solobaccterium moorei IgY和抗混合菌的复合IgY的纯度分别可达到98.0%、97.8%、97.1%,它们的效价分别可达到1:32000、1:32000、1:16000,均能维持三周左右。免疫印迹分析和间接荧光免疫分析表明,特异性IgY能分别与抗具核梭杆菌和Solobaccterium moorei特异性结合。用酶联免疫吸附法检测发现特异性IgY的交叉反应较弱。稳定性的结果分析表明,IgY在温度低于75℃、pH值在4-9范围内能保持较好的的稳定性。在模拟胃液环境中,IgY对胃蛋白酶十分敏感,而在模拟肠道环境中IgY对胰蛋白酶有较好的的抵抗力。抑菌实验表明,抗具核梭杆菌IgY能够显著抑制(P<0.05)具核梭杆菌的生长,抗Solobaccterium moorei的IgY能够显著抑制(P<0.05)Solobaccterium moorei的生长,抗两种混合菌的复合IgY对具核梭杆菌和Solobaccterium moorei均有抑制作用(P<0.05)。 在本实验中,制备了抗具核梭杆菌IgY、抗Solobaccterium moorei的IgY以及抗具核梭杆菌和Solobaccterium moorei混合菌的复合IgY。其特异性强、纯度高。此外,特异性IgY能在体外与对应病原菌发生特异性结合,并对其有较好的抑制作用。本研究为特异性IgY在慢性根尖炎的防治应用奠定了基础。