[目的]　　1.研究空白血清不同浓度及补肾活血方药黄芪三仙汤，补肾方药金匮肾气丸各剂量含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响，确定培养成骨细胞的最佳剂量含药血清浓度。　　2.研究补肾活血方药黄芪三仙汤含药血清、补肾方药金匮肾气丸含药血清及空白血清对成骨细胞蛋白质组表达差异的影响。　　3.通过差异蛋白点的质谱鉴定，初步了解他们的性质、功能。　　[方法]　　1.采用混合酶消化法体外分离细胞，通过形态学标准和细胞碱性磷酸酶染色鉴定细胞;制备实验组补肾活血方药黄芪三仙汤不同剂量的含药血清，补肾方药金匮肾气丸不同剂量的含药血清及空白组血清，并用各组血清对体外培养成骨细胞进行干预实验，采用MTT法观察各空白血清浓度及各剂量含药血清浓度对成骨细胞增殖的影响。　　2.应用双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis简称2-DE）方法，研究黄芪三仙汤含药血清，金匮肾气丸含药血清及空白血清对成骨细胞蛋白质组的影响，并在重复实验中进行实验条件的优化与改良;得到的2-DE图像用Image-Master2D Platinum软件进行统计学分析，选取Overlap Ratio绝对值≥2点为差异蛋白点。　　3.选取10个有明显表达差异的蛋白质点进行胶内胰蛋白酶解，再使用MALDI-TOF/TOF-MS质谱仪一一分析，将质谱分析得出的指纹图谱经过数据库检索分析后，识别鉴定各个蛋白质。　　[结果]　　1.采用混合酶消化法分离培养出的细胞，通过形态学标准和细胞碱性磷酸酶呈阳性染色确定培养的细胞为成骨细胞。血清干预实验中，10％、15％、20％空白血清组与5％空白血清组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);而15％、20％空白血清组与10％空白血清组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05)。黄芪三仙汤等效剂量血清组及2倍等效剂量血清组与0.5倍等效剂量血清组和空白血清组比较差异有统计学意义(P＜0.01)，2倍等效剂量血清组与等效剂量血清组亦比较差异有统计学意义(P＜0.05)。金匮肾气丸等效剂量血清组及2倍等效剂量血清组与0.5倍等效剂量血清组和空白血清组比较差异有统计学意义(P＜0.01)，2倍等效剂量血清组与等效剂量血清组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05);而黄芪三仙汤与金匮肾气丸各等剂量间比较差异无统计学意义。　　2.采用优化后的双向凝胶电泳条件取得了重复性较好的2-DE图谱;通过Image-Master2D Platinum图像分析软件对每组三块胶图谱分析后显示:空白对照组、黄芪三仙汤组、金匮肾气丸组分别检测到平均蛋白点数为(938±26)、(875±34)和(904±22)。经分析空白对照组、黄芪三仙汤组、金匮肾气丸组共有38个蛋白质点具有明显差异。其中与空白组比较，两加药组表达均上调的蛋白点有5个，表达均下调的蛋白点有2个;与空白组比较，金匮肾气丸组表达没有差异，而黄芪三仙汤组表达上调的蛋白点有2个，表达下调蛋白点有6个;与空白组比较，黄芪三仙汤组表达没有差异，而金匮肾气丸组表达上调的蛋白点有16个，下调的蛋白点有7个。　　3.送检的10个差异蛋白点经MALDI-TOF/TOF-MS分析获得了10张肽质量指纹图谱和50张肽片段指纹图谱，通过蛋白数据库搜索匹配得分大于64分的有8个蛋白点，其中有4个蛋白点鉴定结果的等电点和分子量都与双向电泳图谱中的蛋白点位置比较一致，且匹配的物种也与实验所用一致，是比较可信的鉴定结果。　　[结论]　　1.采用混合酶多次消化法可以获得足够数量和纯度的成骨细胞，并且符合成骨细胞形态及功能特点，而且此法简单、实用，适于做体外实验研究模型。黄芪三仙汤、金匮肾气丸等效剂量和2倍等效剂量的10％含药血清浓度对成骨细胞增殖有明显促进作用。　　2.通过蛋白质双向凝胶技术结合质谱兼容的硝酸银染色可以得到分辨率较高，重复性较好的各实验组成骨细胞的蛋白质组图谱，为进一步进行质谱鉴定奠定了良好的基础。　　3.10个差异蛋白点质谱鉴定出了4个比较可信的蛋白，分别是:抑制素(prohibitin)、转录延伸因子B多肽1(transcription elongation factor B(SIII)，polypeptide1)、核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase)、肥大细胞羧肽酶A(mast cell carboxypeptidase A)，按照功能分类大致与能量代谢、细胞增殖、信号转导相关。