【摘 要】
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小反刍兽疫（Peste des petits ruminants,PPR）由小反刍疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）感染小反刍动物引起的高度传染性的一类动物疾病,山羊、绵羊对PPRV高度易感,患病山羊和绵羊发病率、死亡率可高达100%,严重威胁全球养羊业的健康发展。尽管PPRV弱毒疫苗能控制PPR的爆发流行,散发或亚临床病例仍时有发生,PPR防治形
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小反刍兽疫（Peste des petits ruminants,PPR）由小反刍疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）感染小反刍动物引起的高度传染性的一类动物疾病,山羊、绵羊对PPRV高度易感,患病山羊和绵羊发病率、死亡率可高达100%,严重威胁全球养羊业的健康发展。尽管PPRV弱毒疫苗能控制PPR的爆发流行,散发或亚临床病例仍时有发生,PPR防治形势不容乐观。因此,研究和开发有效的抗PPRV药物对于保证我国养羊业的持续发展有着十分重要的意义。采用MTT法测定利巴韦林、阿昔洛韦、盐酸吗啉胍、聚肌胞、金刚烷胺、二脱氧肌苷、乙酰水杨酸、伊米丁、磷酸奥司他韦、齐多夫定、法匹拉韦、RSV604、波普瑞韦、咖啡酸、2-脱氧-D-葡萄糖、霉酚酸、阿比多尔、噻托溴铵、6-氮杂尿苷、6-甲基巯基嘌呤核苷、丁基硫和雷西莫特等22种常见抗病毒药物的最大无毒浓度;用最大无毒浓度的供试药物处理PRRV感染的Vero细胞,根据细胞病变筛选具有抗PPRV活性的药物;采用IFA试验和Western-blot检测法匹拉韦、利巴韦林和阿昔洛韦的抗PPRV效果;将法匹拉韦和利巴韦林分别作用于病毒感染的Vero细胞,采用Westernblot和噬斑形成试验分别检测法匹拉韦和利巴韦林对病毒吸附、侵入、复制和释放的影响。采用q PCR和Western-blot分别检测PI3K/AKT和JAK/STAT信号通路及其下游信号分子,以阐明法匹拉韦和利巴韦林抗PPRV的作用机制。结果表明:1、抗PPRV药物的筛选在22种供试药物中,50μg/m L的法匹拉韦,12.5μg/m L的利巴韦林和25μg/m L的阿昔洛韦具有抗PPRV活性,显著抑制PPRV感染引起的细胞病变。经法匹拉韦和利巴韦林处理的PPRV感染的Vero细胞内病毒结构蛋白H、F和N的表达水平显著下降,PPRV增殖相应显著减少;阿昔洛韦也能显著降低病毒H和F蛋白的表达水平。上述药物体外抗PPRV效果依次为法匹拉韦、利巴韦林和阿昔洛韦。2、法匹拉韦和利巴韦林对PPRV增殖周期的影响法匹拉韦和利巴韦林均能显著抑制PPRV对Vero细胞的吸附、侵入和释放,可见法匹拉韦和利巴韦林在PPRV增殖周期均能发挥其抗病毒活性。3、法匹拉韦和利巴韦林通过介导JAK/STAT信号通路抑制PPRV增殖PPRV感染的Vero细胞STAT表达水平显著下调（P＜0.05）,法匹拉韦和利巴韦林能显著上调PPRV感染的Vero细胞STAT表达水平（P＜0.05）;法匹拉韦能促进JAK/STAT通路下游抗病毒蛋白基因ISG54、PKR、IRF9和Mx A的表达（P＜0.05）;利巴韦林则促进ISG20和Mx A的表达（P＜0.05）。提示JAK/STAT可能是法匹拉韦和利巴韦林抑制PPRV增殖的重要信号通路。4、法匹拉韦和利巴韦林通过介导PI3K/AKT信号通路抑制PPRV增殖PPRV感染的Vero细胞PI3K/AKT表达水平显著上调（P＜0.05）并分别激活下游信号分子p-GSK3、p-Bad、p-CREB和p-NFκB（P＜0.05）,并提高Bcl-2抗凋亡蛋白的表达水平;而法匹拉韦和利巴韦林能显著下调PPRV感染的Vero细胞PI3K/AKT表达水平（P＜0.05）,抑制下游信号分子p-GSK3、p-Bad、p-CREB和p-NFκB（P＜0.05）的表达,并降低Bcl-2的表达水平,提示PI3K/AKT可能是法匹拉韦和利巴韦林抑制PPRV增殖的重要信号通路。综上所述,法匹拉韦和利巴韦林能够显著地抑制PPRV的吸附、侵入、复制和释放过程,通过上调PPRV感染的Vero细胞JAK/STAT表达水平,其中法匹拉韦上调抗病毒蛋白基因ISG54、PKR、IRF9和Mx A的表达,利巴韦林则上调ISG20和Mx A的表达;法匹拉韦和利巴韦林通过抑制PPRV介导的PI3K/AKT信号通路及四个下游信号分子GSK-3、CREB、Bad和NFκB的表达,并降低Bcl-2抗凋亡蛋白的表达,进而抑制PPRV感染细胞的存活,促进细胞的凋亡,从而发挥抗病毒作用。
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