旋毛虫是分布最为广泛的寄生虫之一，可感染人和150多种哺乳动物。由旋毛虫引起的旋毛虫病是一种严重的人兽共患病，若不及时诊断和治疗，患者的死亡率可达3％～30％。自1835年发现旋毛虫病以来，不但未能将该病完全控制，其流行范围反而有所扩大，现已被列入再度肆虐的疾病。该病不仅严重危害人类健康，也给养猪业和食品工业造成重大的经济损失。人类主要因生食或半生食猪肉而感染，猪肉中旋毛虫的检疫对于预防人体旋毛虫病非常重要。因此，目前急需建立一种快速、简单、能够广泛应用的旋毛虫病诊断和检疫方法。随着分子生物学技术的发展及其在寄生虫学上的广泛应用，基因重组抗原由于可大量制备、特异性好等优点，有希望用于肉类和肉制品中旋毛虫的检疫及旋毛虫病的免疫诊断。因此，寻找具有特异性的旋毛虫抗原基因，继而通过基因工程技术大量制备重组蛋白抗原是当前的研究热点。 本研究旨在应用基因工程方法，通过PCR扩增出旋毛虫肌幼虫的Ts43基因，并通过合适的酶切位点，将其插入原核表达载体pET-30a(+)中，构建并表达pET30a(+)-Ts43，获得43 kDa重组蛋白。通过Western blot分析43kDa重组蛋白的抗原活性，为进一步用于旋毛虫检疫、免疫诊断及疫苗研制打下基础。 材料与方法 1．旋毛虫Ts43基因的克隆与序列分析：登陆GenBank寻找旋毛虫43kDa抗原的cDNA序列，利用生物学软件分析其编码蛋白的二级结构和信号肽区域后设计出一对巢式引物，通过RT-PCR扩增出43kDa的有抗原活性的全部基因序列，并将其插入到克隆和表达载体pET-30a(+)中，构建重组质粒pET30a(+)-Ts43，对重组质粒进行鉴定，结果正确后测序，并通过生物学软件Omiga2.0对Ts43抗原基因进行序列分析和比较。 2．pET30a(+)-Ts43原核表达系统的筛选：将重组质粒转化合适的宿主大肠杆菌DH5α，经抗生素抗性筛选阳性克隆，提取质粒后酶切电泳鉴定重组质粒。