甲酸脱氢酶属于D-2-羟基酸脱氢酶类，它可以将甲酸氧化为CO2，同时将NAD+还原为NADH。NAD+依赖型的甲酸脱氢酶(FDH)广泛存在于自然界中，目前已经在多种细菌和真菌中发现了FDH，甚至在一些哺乳动物细胞中也发现了甲酸脱氢酶基因，例如鼠类和人类。 甲酸脱氢酶在工业生产中有着重要应用，常用于工业生产中的辅酶再生体系。由于从自然界天然微生物中提取FDH成本比较高，目前对甲酸脱氢酶研究的主要方向集中于采用基因工程方法构建重组菌，通过重组菌的高效表达获得酶。 本文首先利用YPD培养基，在30℃培养了含有NAD+依赖型的甲酸脱氢酶基因的博伊丁假丝酵母，提取基因组，并以此基因组为模板进行PCR扩增，得到大小约为1.1kb的基因片段。将此小片段和T载体pMD18-TSimpleVector连接，得到重组质粒载体pMD18-T-fdh。双酶切表达载体pET28a(+)和pMD18-T-fdh，经T4DNA连接酶连接得到重组质粒pET28a(+)-fdh。将重组质粒转化到表达宿主菌EcoliBL21(DE3)中进行表达，经SDS-PAGE电泳验证蛋白表达。 重组菌构建成功后，对重组菌的发酵条件进行了优化。得到了优化培养基：Na2HPO4·7H2O13g/L，NaCl0.5g/L，KH2PO43g/L，NH4Cl3.5g/L，MgSO40.2g/L，葡萄糖10g/L，微量元素2ml/L；培养条件为：摇瓶装液量30ml/250ml，初始pH值为7.5，接种量为4％；诱导条件为：对数生长前期开始诱导，IPTG最终浓度为0.4mM，诱导温度为28℃，诱导后培养时间为6h。甲酸脱氢酶粗酶液酶比活达到0.13U/mg。 最后在15L发酵罐上对重组菌进行了放大培养，在分批补料发酵方式下，通过补加葡萄糖，菌体的OD600最高达到83，发酵液中FDH酶总活达到11.9U/ml。在pH-stat法补料发酵方式下，菌体最终OD600达到98，发酵液中FDH酶总活力达到12.1U/ml。