苹果属观赏海棠McMYB16、McMYB12的克隆及表达分析

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花色苷是广泛存在于自然界中的类黄酮物质,是一类从红到蓝到紫的植物色素,其对植物中花色、叶色、果色的形成具有重要的地位,目前对于花色苷的代谢途径研究较为深入,植物花色苷的生物合成主要受两类基因调控,一类是结构基因,直接编码花色苷合成途径中的酶,在不同植物中所共有,另一类是调节基因,调节基因是调控结构基因的表达活性和表达程度的基因,正是调节基因调控着结构基因的时空表达,从而决定着花色苷合成的时间和分布,而其中MYB蛋白是植物花色苷合成途径中涉及最为广泛的调节因子,因此MYB转录因子的克隆对探究花色苷合成途径进而研究植物色泽形成机理具有重要作用。以苹果属观赏海棠品种‘王族’叶片总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,克隆获得1条1350bp的MYB基因cDNA全长序列,其基因编码区共768bp,编码255个氨基酸,命名为McMYB16。氨基酸序列多重比对和系统进化树对McMYB16蛋白分析;实时荧光定量PCR和高效液相色谱法对观赏海棠不同品种不同时期的McMYB16、McC4H表达量、花色苷含量进行测定分析。结果表明:McMYB16与MdMYB16和AtMYB4同源性较高,并与MdMYB16处于同于分支,与AtMYB4亲缘关系较近。它与McC4H表达量、花色苷含量成负相关性。推测该基因为苯丙烷合成途径中的转录抑制子,通过调控公共苯丙烷途径的重要关键酶基因McC4H的表达开启与关闭从而起到对下游途径的抑制作用。以苹果属观赏海棠品种‘王族’叶片总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,克隆获得1条1632bp的MYB基因cDNA全长序列,其基因编码区共1047bp,编码348个氨基酸,命名为McMYB12。氨基酸序列多重比对和系统进化树对McMYB12蛋白进行分析,结果表明:McMYB12与AtMYB12亲缘关系较近。且其蛋白质三级结构与AtMYB12也较为相似,其在选用的观赏海棠品种中的各个时期均有表达,且在新叶有色类品种‘绚丽’、绿色叶品种‘火焰’中的相对表达量与花色苷含量成负相关趋势,推测该基因与类黄酮代谢途径较为相关,其可能与AtMYB12具有相似的生物学功能,为黄酮醇代谢合成途径中的特异性调节基因。
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