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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)最常见及最严重的慢性并发症之一,它己成为导致终末期肾衰竭(ESRD)的主要病因之一。近年来,糖尿病肾病的发病率逐年升高,给社会和家庭都带来的沉重的经济和精神负担。国内外多项研究表明,糖尿病肾病的发病与多元醇通路激活、蛋白激酶C激活、氧化应激、肾血流动力学改变、血管活性物质、细胞因子、易感基因背景等多方面因素有关,但糖尿病肾病的具体发病机制目前尚未确切明了。因此,探索DN的发病机制及防治策略成为目前国内外肾脏病学者热切关注的课题。Megsin(mesangial cell-predominant gene with a homology to serpin)是一种在系膜细胞优势表达的基因,属丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族。megsin基因位于人类第18号染色体的长臂21.3区,长约20kb,包括8个外显子和7个内含子。研究证实megsin在糖尿病肾病的肾组织中表达增强,与肾脏细胞外基质积聚、肾脏肥大及肾功能受损程度相一致,提示megsin在糖尿病肾病的发生发展中起一定作用。本课题拟通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性探讨河北地区汉族人群megsin基因C2093T多态性与糖尿病肾病的发病关系,旨在对糖尿病肾病的诊断及防治提供分子遗传学的理论依据。对象与方法:随机选取2009年10月～2010年10月期间在我院肾内科及内分泌科住院的2型糖尿病患者158例,按尿微量白蛋白将其分为单纯糖尿病组84例和糖尿病肾病组74例。在糖尿病肾病组中,又根据其尿蛋白及肌酐水平分为微量蛋白尿组42例、临床蛋白尿组15例和肾功能不全组17例。同时随机选取在我院进行体检的健康无糖尿病对照者80例作为正常对照组。分别取各受试者的肘静脉血3ml,用于提取基因组DNA及检测各项生化指标。用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测158例2型糖尿病患者和80例正常对照者的megsin C2093T基因型多态性。同时检测各受试者的HbA1c、血糖、胆固醇、甘油三酯、肌酐、尿素氮等生化指标,测量血压、身高、体重,计算体重指数(Body mass index,BMI)。使用Hardy-Winberg平衡检验法对megsin C2093T各基因型分布频率进行检验。对所有计量资料均进行正态性检验,正态分布的资料以均数±标准差(?x±s)表示,非正态分布的资料采用中位数及四分位数间距表示,计量资料的组间比较用方差分析或秩和检验;计数资料组间比较用χ2检验;使用Logistic回归分析来检测2型糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素。所有操作均使用SPSS17.0软件执行,P<0.05为有统计学意义。结果:1各组间的生化指标及临床指标分析与健康对照组相比,2型糖尿病组的BMI、收缩压、舒张压、肌酐、尿素、血糖、甘油三酯、胆固醇均明显升高(P<0.05或0.01)。与单纯糖尿病组相比,糖尿病肾病组的收缩压、舒张压、肌酐、尿素氮明显升高(P<0.05或0.01)。与微量蛋白尿组相比,临床蛋白尿组和肾功能不全组的收缩压、尿蛋白明显升高(P<0.05或0.01),与微量蛋白尿组及临床蛋白尿组相比,肾功能不全组的病程、收缩压、舒张压、肌酐、尿素、尿蛋白均明显升高(P<0.05或0.01)。2 PCR扩增产物电泳结果及对各基因型Hardy-Winberg平衡检验Megsin基因C2093T位点的PCR扩增片段全长为256bp,PCR扩增片段与限制性内切酶HaeⅢ反应后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果分为以下三种:仅1条长为256bp条带的为TT基因型,有114bp、142bp两条条带的为CC基因型,有114bp、142bp、256bp三条条带的为CT基因型。健康对照组、单纯糖尿病组及糖尿病肾病组三组研究对象的megsin基因C2093T各基因型分布频率符合Hdary-Weinbger平衡,三组研究对象的χ2值分别为2.22、3.34、2.87,P值均大于0.05,说明该研究对象具有较好的群体代表性。3各组中基因型及等位基因的分布糖尿病组和健康对照组的megsin基因C2093T基因型及等位基因频率均无明显差异。在糖尿病组中,单纯糖尿病组和糖尿病肾病组的C2093T基因型有显著性差异,糖尿病肾病组的CT基因型频率显著高于单纯糖尿病组(48.65% vs 30.95%,P<0.05),等位基因频率无明显差异。在糖尿病肾病组中,微量蛋白尿组、临床蛋白尿组和肾功能不全组三组间C2093T基因型及等位基因无显著性差异。4各基因型间的生化指标、临床指标和糖尿病肾病发生率的分析。糖尿病患者的各基因型组间年龄、性别、病程、BMI、血压、血糖、HbA1c、肌酐、尿素、甘油三酯、胆固醇、尿蛋白排泄率均无显著性差异(P值均>0.05)。在糖尿病患者中,糖尿病肾病发生率在CT基因型中为58.06%,显著高于TT基因型的25.00%(χ2=4.410,P<0.05)和CC基因型的41.67%(X2=3.84,P=0.05)。与TT基因型相比,CT基因型的糖尿病肾病发病率的危险度OR=4.145,95%CI 1.024-16.855,即CT基因型的患糖尿病肾病的风险是TT基因型的4.154倍。与CC基因型相比,CT基因型糖尿病肾病发病率的危险度OR=1.938,95%CI 0.997-3.770,即CT基因型的患糖尿病肾病的风险是CC基因型的1.938倍。5糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素分析使用Logistic回归分析,得出megsin基因多态性、病程和收缩压是2型糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素。结论:1河北地区汉族人群存在megsin基因C2093T多态性。2 megsin基因C2093T多态性可能与2型糖尿病发生糖尿病肾病有关,CT基因型可能是2型糖尿病发生糖尿病肾病的易感基因。