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目的:病理性角膜新生血管（CNV）对视力构成严重威胁,由于眼睛的特殊解剖结构,临床治疗选择有限。异甘草素（ISL）作为一种天然黄酮类化合物,已被证明具有治疗CNV的潜力,但由于其水溶性差和渗透性弱,限制了其治疗应用。为了克服这些临床应用的局限性,本研究设计了一种新型的ISL负载纳米乳制剂用于眼局部治疗角膜新生血管,并对开发的异甘草素纳米乳（ISL-NE）滴眼液的理化性质进行评估,研究其体外角膜通透性及细胞毒性、ISL-NE单次滴眼后在兔眼的药代动力学特征及体内抗小鼠角膜新生血管药效,为ISL-NE在临床上的应用提供前期实验基础与理论依据。方法:首先建立体外分析测定ISL的方法学,通过紫外分光光度计全波长扫描观察ISL的最大吸收峰,从而确定高效液相色谱法（HPLC）的检测波长,通过专属性考察、标准曲线建立及精密度、回收率的考察,建立ISL体外含量测定的方法。为制备ISL-NE,首先通过溶解度实验筛选出ISL具有较高溶解度的辅料,从而确定处方所用的脂质、表面活性剂及助表面活性剂,反相乳化法（PIC）制备空白纳米乳滴眼液,用于绘制伪三元相图从而确定脂质质量范围及表面活性剂与助表面活性剂质量比（Km）。以脂质质量（X1）、表面活性剂与助表面活性剂总质量（X2）为考察因素,以粒径（Y1）和包封率（Y2）为评价指标,采用星点设计-效应面法（CCD-RSM）进行优化,得到制备ISL-NE的最优处方配比。成功制备ISL-NE后,对其粒径大小、多分散指数（PDI）、电位、pH、渗透压及形态进行考察,评估其理化性质,并考察4℃及25℃下的3个月内储存稳定性。使用透析袋法,以1%Tween-80-人工泪液为释放介质对ISL-NE的释放规律进行考察。使用Side-Bi-Side扩散池采用新鲜离体兔眼角膜,进行离体角膜通透实验,研究ISL-NE的角膜通透性。体外细胞毒性实验通过研究不同稀释比例下的ISL-NE对人角膜上皮细胞（HCECs）细胞活力的影响来评估ISL-NE的细胞毒性。体内刺激性实验选用6只新西兰大白兔采用自身对照法,依据Draize评分标准评估ISL-NE的眼部刺激性。在兔体内药动学研究中,建立了眼组织中HPLC的检测ISL含量的方法,测定单剂量给药后兔眼泪液、结膜、角膜及房水中ISL的含量来研究ISL-NE的眼部药代动力学特征,并与ISL混悬剂（ISL-Susp）对比,DAS 2.0药代动力学软件计算ISL-NE在兔眼中的主要药代动力学参数。通过建立碱烧伤诱导小鼠角膜新生血管（CNV）模型来研究不同浓度的ISL-NE的抗CNV作用,以生理盐水组为阴性对照组、以地塞米松磷酸钠滴眼液为阳性对照组。裂隙灯显微镜照像系统记录第1、3、7天的角膜新生血管图像,Image J软件计算第7天的角膜新生血管面积。观察角膜组织病理切片、蛋白因子VEGF-A及MMP-2表达的检测来评估ISL-NE对角膜新生血管的疗效。结果:本研究成功建立了ISL体外含量测定的方法学,具有专属性,线性关系及精密度良好且回收率高。根据溶解度实验结果,筛选出ISL溶解度高的三种辅料。辛癸酸丙二醇酯为脂质,聚氧乙烯蓖麻油EL-35（EL-35）为表面活性剂,聚乙二醇400（PEG 400）为助表面活性剂用于ISL-NE的制备。通过对伪三元相图的绘制,确定了Km为4:1时,纳米乳形成的区域面积最大,脂质质量范围为0.4-1.2 g。通过CCD-RSM优化处方得到的最优处方配比为辛癸酸丙二醇酯为0.442 g,EL 35为0.906 g,PEG 400为0.227 g加水定容至20 m L的最优处方。根据CCD-RSM制备的ISL-NE在电子透射显微镜下观察为球形,平均粒径为34.56±0.80 nm,PDI小于0.05,电位为-1.95±0.97 mv,pH值为6.26±0.03,渗透压为289±1.53 mOsmo L/kg,包封率为99.96±0.02%,药物含量约为1.98±0.03 mg/m L,且稳定性考察结果显示在4℃及25℃时具有良好的储存稳定性。体外释放研究显示12小时后,ISL-NE中ISL的累计释放量为82.88±2.87%,呈现延长药物释放时间及增加药物释放量的特点,而ISL-Susp中ISL仅释放36.05±1.06%。二者体外释放规律均符合一级动力学模型。离体角膜通透性研究中ISL-NE的角膜通透量显著大于ISL-Susp。体外细胞毒性实验显示ISL-NE对HCECs无明显毒副作用,且在兔眼治疗过程中表现出良好的耐受性。兔眼部药代动力学研究表明,单次给药后泪液、角膜和房水的药物浓度-时间曲线(AUC0-8h)下面积分别是ISL-Susp的5.76倍、7.80倍和2.13倍。此外,小鼠体内药效学研究显示ISL-NE（0.2%）与地塞米松治疗（0.025%）对CNV的抑制效果相当。酶联免疫吸附试验（Elisa）表明角膜血管内皮生长因子（VEGF-A）和基质金属蛋白酶（MMP-2）的表达减少。结论:本研究中制备的ISL-NE滴眼液作为一种新型眼局部递送系统,对难溶性药物ISL具有增溶作用,同时提高了ISL的角膜通透性,具有良好的理化性质及较高的眼部生物利用度,眼部耐受性好。这可能是治疗CNV的一种有前途的、安全的、有效的方法,为角膜新生血管的治疗提供新思路,也为ISL-NE在临床的应用提供实验基础及理论依据。