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目的:研究真皮来源的成纤维细胞(fibroblasts,FBs)与其同源的多系分化应激耐受细胞(Multilineage Differentiation Stress-enduring cells,Muse)这两种细胞的RNA转录组学差异与开放染色质组学差异。方法:(1)从健康男性包皮组织中获取真皮FBs。16小时长时胰酶消化(longterm trypsinization,LTT)获取Muse细胞。Muse细胞采用悬浮培养形成Muse细胞簇。使用悬浮-贴壁-悬浮培养方式进行Muse细胞扩增。使用波形蛋白抗体对FBs荧光染色鉴定;使用阶段特异性胚胎抗原-3(stage-specific embryonic antigens-3,SSEA-3)与白细胞分化抗原105(cluster of differentiation 105,CD105)荧光染色鉴定Muse细胞。(2)Trizol裂解Muse细胞与FBs,抽提RNA,进行建库;用Fastqc软件对原始数据进行质量评估。使用STAR软件将原始数据比对到参考基因组。通过R包(DEseq2)对差异基因数据进行进一步分析,并对靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析。将Muse细胞与FBs使用Tn5转座子酶识别染色质片段,建库上机。Fastqc软件对原始数据进行质量评估。bowtie2软件将原始数据比对到参考基因组。对峰(peaks)区域进行基因组位置注释和基序(motif)分析,并对靶基因进行GO和KEGG富集分析。取两种测序结果进行Venn交集分析。使用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)与免疫印迹(western blot)分析法验证测序后差异基因AKT在AKT信号通路的表达。结果:(1)从包皮组织中获取到大量的FBs,采用针对波形蛋白的抗体进行荧光染色,显示阳性。16小时长时胰酶消化法可以获得Muse细胞,这些细胞在低黏附悬浮培养中,增殖并形成球状的细胞簇。这些细胞簇中的细胞表达SSEA-3与CD105,证实LTT处理后获取及增殖后的细胞为Muse细胞。(2)RNA测序检测到2355个显著差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)调控转录组,包括1222个上调和1133个下调的DEGs。RNA测序和转座酶研究染色质可接近性的高通量测序技术(Assay for Transposase-Accessible Chromatin with high throughput sequencing,ATAC)的全景图证实了FBs和Muse细胞之间转录因子和开放染色质区域的差异。ATAC测序分析表明:Muse细胞比FBs有更多的重复性且有意义的峰,峰信号集中在转录开放起始区(transcription start sites,TSS)启动子-转录起始位点附近。在两组细胞开放染色质区域中,超过200个转录因子具有结合Motif序列。(3)在RNA测序分析与ATAC测序分析及联合分析后,对AKT1/2等基因进行q RT-PCR分析,Muse细胞的AKT1/2基因表达量高于FBs组。在Muse细胞的培养基中加入AKT抑制剂培养10天,提取同源的FBs进行PCR与免疫印迹分析,发现Muse细胞中的总AKT基因表达量不变,磷酸化AKT基因表达量在正常的Muse细胞组中高于其他两组。结论:(1)Muse细胞与FBs在转录水平与开放染色质水平差异基因变化显著。(2)RNA测序和ATAC测序分析结果共同阐明了Muse细胞和FBs不同生物学特性的遗传基础。结果提示细胞周期转换和AKT信号通路可能影响Muse细胞的形态和生物学特性。