第一部分：　　 目的:研究生长激素释放肽-6（GHRP-6）与其受体（GHS-R）结合后细胞内的信号传导机制，检测信号传导通路中发挥主要作用的蛋白激酶C（PKC）亚型。　　 方法:首先检测GHRP-6对大鼠垂体GH腺瘤细胞系GH3细胞生长激素（GH）分泌和cAMP反应元件结合蛋白（CREB）磷酸化的调节作用。然后对GHRP-6诱导激活的PKC亚型进行初步筛选：应用PKC广谱激动剂佛波醇酯（PMA）和两种PKC抑制剂（G?6983和rottlerin）干预GH3细胞。对初步筛选出的PKC亚型进行RNA干扰，沉默其表达，以确定该亚型的作用：根据Genebank数据库提供的基因核苷酸序列设计干扰序列，由生物公司帮助合成；利用lipo2000作为载体转染GH3细胞。转染后，应用Western blot检测该亚型的蛋白表达，以确定转染效率。同时检测基因沉默该亚型后，GHRP-6对GH分泌和CREB磷酸化的调节作用的变化。并检测GHRP-6作用后该亚型的活性。　　 结果:GHRP-6诱导GH分泌呈时间和浓度依赖性(P＜0.05)，并且可以增强生长激素释放激素（GHRH）的作用(P＜0.05)。GHRP-6诱导CREB磷酸化呈时间依赖性。抑制PKC，特别是基因沉默PKCσ减弱了GHRP-6诱导的CREB磷酸化和GH分泌。并且，GHRP-6可以诱导PKCσ活化。　　 结论:PKC（特别是PKCσ）参与了GHRP-6诱导的CREB磷酸化和GH分泌，将PKC信号通路和PKA信号通路连接了起来。　　 第二部分：　　 目的:研究生长激素释放肽-6（GHRP-6）与其受体（GHS-R）结合后细胞内的信号传导机制，检测信号传导通路中PKC的下游分子。　　 方法:首先利用腺苷酸环化酶（AC）的抑制剂MDL-12,330A以不同浓度干预GH3细胞2小时，然后给予GHRP-6（100nM）刺激细胞。应用cAMP-酶联免疫吸附试验（cAMP-ELISA）检测AC被抑制后cAMP的生成水平。同时应用GH-ELISA检测AC被抑制后，GHRP-6诱导的GH分泌水平的变化，应用Western blot检测AC被抑制后，GHRP-6诱导的CREB磷酸化水平的变化。　　 结果:MDL-12,330A可以明显抑制基础的和GHRP-6诱导的cAMP生成（P＜0.01）；AC被MDL-12,330A抑制后，GHRP-6诱导的GH分泌水平和CREB磷酸化水平明显减弱（P＜0.01）。　　 结论:GHRP-6诱导垂体生长激素腺瘤生长激素分泌和CREB磷酸化需依赖腺苷酸环化酶的活化。　　 第三部分：　　 目的:检测一氧化氮（nitric oxide，NO）对ghrelin诱导的大鼠GH3细胞的生长激素（GH）分泌和细胞增殖的影响，探讨NO的作用机制。　　 方法:首先检测ghrelin在不同浓度和不同作用时间时对GH3细胞GH分泌和增殖的影响；然后预先用SNAP（NO的供体）和NAME（NO合成酶的抑制剂）干预细胞后，检测NO对ghrelin诱导的GH分泌和细胞增殖的影响；用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测GH水平，MTT法检测细胞增殖，Western免疫印迹法细胞内信号通路蛋白的活性变化。　　 结果:ghrelin刺激GH3细胞分泌GH呈时间和浓度依赖性(P＜0.01)，ghrelin明显刺激GH3细胞的增殖(P＜0.05)；SNAP可抑制基础的和ghrelin刺激的GH分泌(P＜0.05)，对细胞增殖也有明显影响(P＜0.05)，而NAME对GH的分泌和细胞增殖无影响；ghrelin可诱导细胞外信号调节激酶（ERK）的活化，SNAP可以抑制这种效应。　　 结论:ghrelin促进GH3细胞GH分泌和细胞增殖，NO可以抑制些种效应，其机制可能阻断了ghrelin激活的ERK信号通路。