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近年研究发现程序性坏死在炎症、癌症的发生发展中发挥着重要的作用,然而介导程序性坏死的分子机制研究甚少。文献报道肿瘤坏死因子a (TNFa)可诱导小鼠成纤维肉瘤L929细胞程序性坏死。本文中,我们深入探讨了程序性坏死的重要分子机制及其与自噬的关系。我们研究发现,重组人TNFa处理的L929细胞出现典型的坏死样形态,且程序性坏死抑制剂necrostain-1(Nec-1)的加入完全逆转了TNFa诱导的L929细胞死亡；而caspase-8凋亡信号也未被激活,说明TNFa诱导的L929细胞死亡方式为程序性坏死。进一步研究发现MAPK家族成员的p38和NF-кB负调控TNFa诱导的L929细胞死亡,而ERK和JNK并未参与其中。同时,抑制p38阻止了NF-кB的活化。文献报道caspase家族抑制剂zVAD-fink (zVAD)促进TNFa诱导的L929细胞程序性坏死。为进一步验证上述结果,我们将zVAD与TNFa共同作用于L929细胞,发现zVAD的加入进一步下调p38和NF-кB的蛋白表达。p38或NF-кB siRNA不仅促进TNFa诱导的,且增加TNFa+zVAD诱导的L929细胞程序性坏死。程序性坏死过程中通常伴随着自噬的发生。我们研究也发现TNFa诱导L929细胞自噬。自噬泡的形成、MDC和GFP-LC3荧光颗粒的出现,Beclin1蛋白表达增加以及LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化增加都证明了自噬的发生。我们进一步考察了p38和NF-кB在自噬中的作用,结果发现p38或NF-кB的特异性抑制剂和siRNA促进了自噬的发生。说明p38-NF-KB也负调控自噬。Nec-1抑制TNFa诱导的细胞程序性坏死和自噬,然而自噬抑制剂3MA或Beclin1siRNA抑制自噬却促进程序性坏死。虽然Nec-1能抑制TNFa+zVAD诱导的程序性坏死和自噬,然而3MA或Beclin1siRNA并不影响程序性坏死率。进一步研究发现TNFa诱导caspase-6的活化。然而caspase-6抑制剂或siRNA并不影响TNFa诱导的程序性坏死,却促进自噬。说明caspase-6的活化并不是诱导程序性坏死原因,且发挥着负调控自噬的作用。随后我们发现,caspase-6siRNA部分逆转3MA增加的程序性坏死率。Nec-1和3MA的加入促进,而zVAD和caspase-6抑制剂抑制caspase-6的活化。以上结果说明自噬位于程序性坏死下游,在caspase-6活化时自噬发挥负调控的作用。为进一步验证此结果,我们用高浓度的zVAD单独处理细胞,诱导程序性坏死和自噬的发生。结果发现Nec-1也能抑制zVAD诱导的程序性坏死和自噬,然而3MA抑制自噬却并不影响程序性坏死比率。且zVAD处理的细胞并不诱导caspase-6的活化。文献报道活性氧(ROS)也参与诱导程序性坏死的发生,因此我们考察了ROS在TNFa诱导的程序性坏死和自噬中的作用。研究表明TNFa诱导线粒体损伤导致ROS的产生,且依赖于RIP1的激活。ROS的产生促进细胞程序性坏死和自噬。同时我们发现TNFa诱导细胞色素c的释放,但并不影响线粒体膜电位的变化。另外,我们之前的研究发现ROS参与冬凌草甲素诱导的L929细胞自噬和凋亡。本文中,我们进一步考察了NO在此过程中的作用。研究发现冬凌草甲素诱导NO的产生。NO合酶抑制剂1400w和L-NAME以及NO清除剂DTT清除NO产生的同时抑制自噬和凋亡的发生。进一步研究发现冬凌草甲素诱导ERK和p53的活化,抑制ERK或p53的活化或ERK siRNA抑制冬凌草甲素诱导的凋亡和自噬。进一步研究发现NO的产生促进ERK和p53的活化,而ERK和p53的活化正调控NO的产生,从而形成了一个正反馈回路。综上所述,TNFa通过抑制p38和NF-кB的活化诱导L929细胞程序性坏死和自噬。同时自噬位于程序性坏死下游；自噬负调控程序性坏死需要caspase-6的活化。另外ROS的产生也参与了TNFa诱导的程序性坏死好自噬。冬凌草甲素诱导NO-ERK-p53正反馈回路诱导L929细胞凋亡和自噬。