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目的:云芝,为多孔菌科真菌,彩绒革盖菌( Coriolus versicolor, C. versicolor )的子实体或菌丝体,云芝糖肽( polysaccharopeptide,PSP )为云芝菌株菌丝体培养物提取的生物活性物质。目前,PSP在临床上主要用于辅助放化疗,促使放化疗后损伤的机体恢复免疫机能。本课题是在课题组前期工作基础上,采用蛋白芯片检测PSP对健康成人外周血单个核细胞(peripheral blood monouclear cells,PBMC )分泌细胞因子的影响,并从基因水平和蛋白水平检测Toll-like受体( Toll-like receptors ,TLR )信号转导途径中的关键节点的mRNA表达水平和/或蛋白表达水平,从而探索PSP的免疫信号转导机制,进一步验证和探讨PSP免疫信号转导通路。1方法:体外采用Ficoll液密度梯度离心法分离PBMC,分为PSP组和对照组。PSP组加入终浓度为25μg/ ml的PSP药液及终浓度为100μg/ ml的植物血凝素( Phytohemagglutinin, PHA ),对照组只加终浓度为100μg/ ml的PHA。应用蛋白芯片检测PSP作用于PBMC后分泌细胞因子的变化。并采用RT-PCR、Western blot等方法,从mRNA和/或蛋白水平研究PBMC经PSP作用后,TLR信号转导途径中的关键节点,如:含TIR接头分子( TIR-containing adaptor molecule,TRIF ),TRIF相关接头分子( TRIF-related adaptor molecule,TRAM ),肿瘤坏死因子受体相关因子6 ( TNF-receptor associated factor,TRAF6 ),髓样细胞分化因子88 ( Myeloid different factor 88,MyD88 ),MyD88接头样蛋白( MyD88 adaptor-like protein,MAL)以及核转录因子-κB ( nuclear factorκB,NF-κB )等的表达水平。结果:在芯片所包含的23种细胞因子中,PSP组与对照组相比上调≥1.3倍的细胞因子有5个:G-CSF,GM-CSF,IL-1α,IL-6,IFN-γ;有所降低的因子有3个:IL-2,IL-3,IL-5,对其他细胞因子的表达没有显著影响。TLR信号通路中,PSP组与对照组相比,TRAM、TRAF6 ( P < 0.05 )和NF-κB ( P < 0.01 ) mRNA水平显著增高,TRIF mRNA水平有所增高,MAL、MyD88 mRNA水平有所降低;TRAF6、TRAM和NF-κB蛋白表达水平显著增高( P < 0.01 ),MyD88蛋白表达水平显著降低( P < 0.01 )。结论:PSP可以调节免疫细胞的细胞因子分泌;TLR信号通路中的MyD88依赖和TRIF依赖两条通路在PSP免疫信号转导中均发挥作用,其中以TRIF依赖途径即TRAM-TRIF-TRAF6通路为主,表明TRAF6/TLR途径可能是PSP免疫调节的重要信号转导通路之一。