论文部分内容阅读
本论文以猪肩胛骨为原料,通过酶解制备降血压肽,以血管紧张素转化酶(Angiot-ensin Ⅰ-Converting Enzyme, ACE)抑制率为主要指标,筛选出最适酶作为酶解用酶；通过单因素和响应面试验优化该种酶的酶解条件；在此基础上,对酶解底物进行超声波预处理,通过单因素和响应面试验优化超声条件；利用超滤、凝胶层析等分离纯化技术从酶解液中分离纯化降血压肽；探讨猪肩胛骨降血压肽耐消化特性及各种理化因素对其稳定性的影响。研究结果如下。筛选出的最适蛋白酶为风味蛋白酶,最佳酶解条件为：pH 7.0、底物浓度5%、酶解温度53℃、酶解时间4.5 h、酶底比6900 U/g。此条件下制备出猪肩胛骨降血压肽的ACE抑制率为65.31%,半数抑制浓度(Half-inhibitory concentration, IC50)为1.34 mg/mL。对底物的超声条件进行优化,获得的最佳超声条件为：超声时间25 min,超声功率717 W,超声温度40℃,酶解时间3 h。此条件下制备出ACE抑制率为75.58%的猪肩胛骨降血压肽。IC5o值为0.90 mg/mL。采用超滤离心管将酶解液分离为分子量大于10kDa、5kDa-10kDa和小于5 kDa的3个组分,其中,在相同浓度条件下分子量小于5 KDa的组分ACE抑制率最高,IC5o为1.12 mg/mL。超滤分级后分子量小于5 kDa的组分用凝胶层析进一步分离。考察样品浓度、流速、进样量对分离效果的影响,获得最适分离条件。凝胶层析的最适条件：样品浓度为20 mg/mL,洗脱液的流速为0.5 mL/min,进样量为1.2 mL。在此条件下,分离得到6个峰,其中峰2抑制活性最高,该组分IC50为0.56 mg/mL。探讨猪肩胛骨降血压肽耐消化特性及各种理化因素对其稳定性的影响。体外模拟消化实验结果表明,分子量小于5 kDa的降血压肽的胃肠道稳定性优于酶解液,模拟胃、肠消化液未对超滤液中降血压肽的稳定性产生负面影响。猪肩胛骨降血压肽在-20℃、4℃、25℃、37℃四个储藏温度中,-20℃温度下,降血压肽储存30d后仍保持较高活性,37℃时稳定性最差；煮沸1h,对降血压肽的活性无影响；环境pH为中性、弱酸性对降血压肽的ACE抑制率影响最小。可溶性淀粉对降血压肽活性影响最为明显,β-环状糊精(?)糖次之,柠檬酸影响最小。