蛋白核小球藻抗氧化活性物质提取及其抗衰老作用的研究

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衰老是生物体内自然发生而又无法避免的一个生理过程,现代人口出生比例骤减,人的平均寿命增加,导致人口老龄化趋势愈加严重。如何解决养老以及衰老引起的相关疾病成为当今时代的研究热点。导致人衰老原因之一是体内无法维持自由基和抗氧化剂的平衡,产生过量的自由基会氧化损伤细胞导致胞内结构受损,蛋白质失活,组织、器官功能衰竭引起衰老。近期研究发现海洋微藻活性成分多糖、多肽具有抗菌消炎、调节肠胃吸收和促进毒素排泄等作用,但是在抗衰老研究还比较少。蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidesa有抗炎症,改善便秘和增强免疫力等作用。具有多糖、多肽、维生素和矿物质等多种活性物质。本论文以小球藻为原材料,提取出多糖和多肽两种活性物质,以秀丽隐杆线虫为主要模型进行抗氧化活性测试和延缓衰老验证分析。目的:从蛋白核小球藻中提取出具有抗氧化活性的多糖和多肽。对提取的多糖和多肽进行抗衰老作用研究。对小球藻多肽进行纯化鉴定,对抗氧化机制进一步探究。方法:以小球藻粉为原材料,通过水煮醇沉提取和Sevag法除蛋白纯化小球藻多糖,再进行多糖含量分析和单糖组分分析。以小球藻粉为原材料,通过三种酶解法提取抗氧化多肽,作用到秀丽隐杆线虫模型检测线虫的抗氧化胁迫能力来评价抗氧化能力,得出最佳提取方法后通过对小球藻多肽进行超滤分离纯化,得到﹤3kDa、3~10kDa、﹤10KDa、﹥10kDa一共4个组分再进行抗氧化活性测试得出最佳组分。采用百草枯对秀丽隐杆线虫进行氧化损伤进行抗氧化能力测试,对秀丽隐杆线虫进行食物清除率、身体长度、抗高温胁迫、脂褐素检测和运动能力实验进行抗衰老作用研究。以ROS水平变化和SOD活力探究小球藻多肽抗氧化作用机制。结果:小球藻多糖在秀丽隐杆线虫抗氧化胁迫实验中提高了线虫的存活时间,4mg/mL组分存活时间比空白组高30.1%。在衰老表征实验中,抗高温胁迫实验中死亡率比空白组低33.91%,明显提高了线虫耐热能力。在秀丽线虫长至衰老期时(第15天)摆动次数比空白组增加了42.86%,提高了线虫的运动能力。脂褐素检测实验中减少了脂褐素的聚集,与对照组相比降低了33.30%。木瓜蛋白酶提取的蛋白核小球藻多肽最具有抗氧化活性,因此对此多肽进行超滤分离纯化。秀丽线虫氧化胁迫实验表明﹤3kDa的组分最具抗氧化活性。筛选出一条大小为700Da氨基酸序列为Leu-Asn-Gly-Asp-Val-Trp的肽链(PEP1)进行延缓衰老研究。实验发现PEP1在线虫模型上具有抗氧化胁迫能力,2mg/mL和4mg/mL生存时间相较于空白组分别提高了33.82%和39.17%。在高温胁迫实验中2mg/mL和4mg/mL相较于空白组分别提高了和38.94%和51.3%的存活率。PEP1还减少脂褐素生成,与空白组对比降低了28.39%,同时还提高了运动能力,具有抗衰老活性。在ROS水平和检测SOD活力实验中发现可以降低秀丽隐杆线虫因百草枯作用氧化应激突升的ROS水平和提高SOD活力。结论:小球藻多糖在秀丽隐杆线虫模型中体现出抗氧化能力,在没有影响线虫的正常生长发育情况下,改善了衰老期的运动能力和减少脂褐素聚集等,具有延缓衰老的能力。小球藻多肽在秀丽隐杆线虫模型中体现出抗氧化能力。降低了秀丽隐杆线虫因百草枯氧化应激突升的ROS水平,提高了SOD活力。但是多肽组抑制了线虫的进食。小球藻多肽可能通过了饮食限制通路影响了秀丽隐杆线虫的生长发育。
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