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大肠杆菌病是极为常见的畜禽传染病,经常引起地区性散发或小范围爆发,尤其是对规模化养猪场的危害较严重,经济损失较大。致病性大肠杆菌可引起仔猪黄痢、仔猪白痢、仔猪水肿病及断奶仔猪腹泻等,因大肠杆菌血清型很多,各血清型之间有效的交叉保护性差,猪场一旦出现病例常使用大量的抗菌素治疗,引起耐药菌株的出现和持续存在,不易根除。不同地区猪致病性大肠杆菌流行的主要血清型不同,因此,在大肠杆菌病的免疫预防中,很难顾全其血清型的多样性、易变性,经常导致免疫失败。本实验室在对一例猪水肿病诊断中分离得到一株O139,142,26混合血清型大肠杆菌,此前尚未见报道。为了探求这株O混合血清型大肠杆菌的部分生物学特性,开展了如下研究。应用鸟枪法扩增了O139,142,26的O-抗原基因,测序结果显示扩增的O-抗原基因长度为11771bp。通过生物信息学的方法对其结构进行分析,发现其具有10个开放阅读框架及功能基因种类。经与发表的大肠杆菌O139、O26和O142的O-抗原基因序列及O-抗原糖基链的结构进行比较,近化树分析,跨膜蛋白的结构分析以及对乳糖前体(Glc)添加乙酰基的机制分析,结果显示该O混合血清型大肠杆菌的O-抗原基因与大肠杆菌O139 O-抗原基因进化关系最近。实验对致病性大肠杆菌可能含有的12种毒力因子ST、LT、SLT-Ⅱe、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ、FedA、K88、K99、987P、F41、eaeA和irp2进行了PCR鉴定,检测到了志贺样毒素Ⅱ型变异体(Shiga-like toxinⅡvariant, SLT-Ⅱe)基因和F18ab菌毛FedA亚单位基因。用多粘菌素法提取毒素,并对粗提毒素的蛋白含量、对小鼠和Vero细胞的半数致死量进行了测定。夹心ELISA方法确定该毒素为SLT-Ⅱe,对小鼠的半数致死量(LD50)为135.5μg, Vero cell半数致死量(LD50)为1.05×10-5μg,全菌腹腔注射半数致死量LD50为6.5×107CFU。生长曲线测定结果显示,大肠杆菌O139,142,26在相同培养条件下比参考菌株O138、O139生长缓慢。大肠杆菌O139,142,26与常见的10种药物的药敏实验显示,该菌对红霉素和青霉素不敏感,对氨苄青霉素和羧苄青霉素较敏感,对其他7种药物均敏感。针对大肠杆菌血清型众多,难以产生交叉保护的特点,从实际应用的角度制备了大肠杆菌O139,142,26灭活疫苗,通过免疫保护性试验和免疫原性试验,结果显示大肠杆菌O139,142,26灭活疫苗对小鼠具有免疫保护作用,其免疫血清分别与大肠杆菌O139、O142、O26发生凝集反应,且凝集效价分别为1:1280、1:640和1:640,说明用该菌制备的灭活疫苗具有很好的免疫源性,可作为灭活疫苗研究的候选菌株。