目的：建立和优化离体脑组织切片的培养方法，制备适用于活组织电生理学研究的人类脑片标本。方法：（1）建立稳定的Wistar幼鼠脑片体外培养方法：优化啮齿类脑片培养技术，在切片和培养记录过程中使用不同成分的改良人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF），采用界面下培养-快速层流技术,在48h内动态观察脑片局域场电位（local field potential，LFP）变化，采用HE染色、氯三苯四唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色、尼氏染色动态观察脑片组织病理学变化。（2）人类脑片体外培养方法：在优化啮齿类脑片培养方法的基础上，采用神经外科深部脑肿瘤切除手术过程中，开窗切除的非病理大脑皮层组织迅速进行转运、修块和进行体外切片培养，并同上过程监测脑片LFP和神经元组织病理学变化。结果：（1）幼鼠和人类脑片LFP电生理信号均可持续48h以上，但随着培养时间的延长呈衰减趋势；（2）HE染色计数脑片神经元死亡率随时间呈递增趋势，人类和幼鼠脑片均可维持50%以上神经元存活达24h；（3）TTC染色脑片IOD值随时间呈递减趋势，培养24h后呈衰减趋势，48h组仍可见红色区域，各观察时间点人类脑片与幼鼠比较未见明显差异（P<0.05）；（4）尼氏染色IOD值随时间呈递减趋势，幼鼠和人类脑片在24h后明显降低，48h后降至较低水平。结论：人类脑片培养存活时间与啮齿类脑片相似，可以在切片后保存半数以上的神经元存活达24h以上，能够满足活细胞神经电生理研究要求。采用不同的切片和培养ACSF溶液，联合液面下培养-快速层流技术，可以满足手术切除的人类非病理大脑皮层组织体外切片培养前经过1h左右的运输时间。