Septin2对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

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目的:探讨Septin2基因表达变化对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法:培养原代大鼠肾小球系膜细胞,进行以下实验:1)将绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1用电穿孔转染的方法导入细胞,24h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。2)质粒电穿孔转染:细胞分组:①pRK5空质粒转染组,②pRK5-Septin2质粒转染组,分别进行电穿孔转染,Western blot检测两组细胞Septin2蛋白质表达水平,流式细胞仪分析Septin2对细胞周期进程的影响,Western blot检测系膜细胞周期调节蛋白(cyclin D1、cyclinE、p21)的表达变化。3)设计合成GAPDH的siRNA,依不同浓度分为①200nmol/L,②400nmol/L,③800nmol/L组,④无关对照转染组(siCon),电穿孔转染后培养48h,Western blot检测GAPDH蛋白质表达变化。4)siRNA电穿孔转染:细胞分组:①无关对照转染组(Sicon);②siSeptin2转染组。收集细胞蛋白,Western blot检测两组细胞Septin2蛋白质表达水平,流式细胞仪分析siSeptin2对细胞周期进程的影响。结果:1)在80μg质粒,340V电压、550μF电容的电穿孔条件下,原代大鼠肾小球系膜细胞的电转染效率可以达到50%以上;2)与pRK5空质粒转染组相比,pRK5-Septin2质粒可使系膜细胞Septin2的蛋白质表达水平明显提高(P<0.05),流式细胞仪检测发现pRK5-Septin2质粒使G0/G1期细胞百分比明显增多而S期细胞百分比显著减少(P<0.05),同时细胞周期调节蛋白cyclin D1、cyclinE表达水平下调,p21的表达水平上调(P<0.05);3) siGAPDH浓度为800nmol/L时蛋白质水平抑制效果最为显著(P<0.05);4)与无关对照转染组(siCon)比较,siSeptin2转染组Septin2蛋白质表达水平明显降低,流式细胞仪检测结果显示两组细胞G0/G1期及S期细胞百分比无明显差异。结论:Septin2过表达可使大鼠肾小球系膜细胞由G0/G1期向S期转化的百分比减少,细胞周期正调控蛋白表达减少而负调控蛋白表达增多,提示可能通过调节细胞周期蛋白的表达来抑制系膜细胞增殖,影响细胞周期,有望为系膜增生性肾炎提供新的治疗靶点。
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