CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌肿瘤相关抗原(OVA66)表位的研究

来源 :上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lihai_feng
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目的:鉴定CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌肿瘤相关抗原(OVA66)表位.方法:根据表位预测软件的预测结果,选取OVA66蛋白氨基酸序列中两个与HLA-A2分别呈高、低亲和力的肽分子即表位L235(FLPDHINIV)、L236(VLTTKNLFL).体外应用IL-4、GM-CSF、IFN-γ和CD40L诱导HLA-A2+外周血单核细胞生成树突状细胞(DC),经FACS检测细胞表面标志加以证实.CD8<+>磁珠分选PBMC得CD8<+>T细胞,FACS鉴定其纯度.接受抗原肽脉冲的抗原提呈细胞(APC)DC,经3000rad X射线照射后,与CD8+T细胞混合培养.一周后以自体PBMC为APC,接受抗原肽脉冲并经X射线照射后刺激CD8<+>T细胞1次,每隔7天重复1次,共3次后作为细胞毒T淋巴细胞(CTL),应用乳酸脱氢酶(LDH)释放分析法,检测CTL对不同靶细胞的杀伤效应.酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测CTL中分泌IFN-γ的T细胞频率.结论:体外成功诱导具有抗原提呈功能的DC;肿瘤相关抗原OVA66蛋白中与HLA-A2呈高亲和力的肽L235,能诱导自体CD8<+>T细胞增殖,形成具有L235抗原特异性杀伤功能及IFN-γ分泌功能的CTL.该实验证实CTL表位L235能激发HLA-A2限制性CTL对肿瘤抗原特异性免疫应答,在肿瘤防治深入研究中具有良好的应用前景.
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