GABA对断奶和ETEC感染仔猪肠道SIgA分泌的影响及机制研究

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断奶仔猪肠道免疫机能不健全,外源病原体常常导致断奶仔猪发生肠道感染、腹泻,易造成仔猪发育不良甚至死亡。前期研究发现,日粮中添加γ-氨基丁酸(GABA,γ-aminobutyric acid)能调节断奶仔猪肠道功能。SIg A(Secretory Immunoglobulin A)在维持肠道黏膜免疫和预防肠道感染方面起着重要的作用,GABA可能通过SIg A的分泌调控肠道免疫功能。因此,本试验选取37头21日龄健康杜×长×大三元杂仔猪(5.82±0.86 kg),随机分为两组:饲喂基础日粮的对照组(CON组,n=18)和基础日粮中添加40 mg/kg GABA的试验组(GABA组,n=19)。试验期21天。试验第14天,每组随机屠宰6头采样,余下仔猪灌服ETEC(Enterotoxigenic Escherichia coli)菌液构建感染模型,造模后第7天每组再屠宰6头采样。根据是否接种了ETEC,将其分为未感染和感染两个阶段。饲养结束后,统计试验全期仔猪生长性能和脏器指数变化;检测血清游离氨基酸和生化指标以及肠道SIg A分泌和相关细胞因子的表达;采用16s r RNA测序和代谢组学分析肠道微生物组成和代谢物含量,确定添加GABA影响的优势菌株和代谢产物,并进行关联分析等研究GABA对肠道微生物和肠道SIg A分泌的影响,初步探讨肠道微生物在介导GABA促进SIg A分泌中的作用。主要结果有:1)日粮添加GABA对未感染及ETEC感染仔猪体增重、平均日增重、平均日采食量、料重比以及脏器指数没有显著影响(P>0.05)。2)GABA显著提高未感染仔猪血清组氨酸浓度和血钙含量,降低天冬氨酸浓度(P<0.05);对感染仔猪血清氨基酸没有显著影响(P>0.05),但降低了血清白蛋白水平(P<0.05)。3)GABA显著提高未感染和感染仔猪空肠中SIg A含量以及未感染仔猪回肠SIg A表达(P<0.05)。4)GABA显著提高未感染和感染仔猪空肠中IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-13和IL-17等细胞因子浓度及m RNA表达(P<0.01)。5)GABA对断奶仔猪肠道微生物的Alpha多样性没有显著影响(P>0.05),但显著降低了未感染仔猪的Phascoarctobacterium和Butyricicoccus的相对丰度而提高了Enterococcus的相对丰度(P<0.05);在感染仔猪中,GABA则显著提高了Bacteroides和unidentified Ruminococcaceae的相对丰度(P<0.05)。6)GABA对未感染仔猪粪便代谢物组成影响较大,鉴定了hydroxylamine等10种差异代谢物以及相关的6条代谢途径,而GABA对感染仔猪的粪便代谢物组成影响较小。7)关联分析发现,在未感染仔猪中,粪便中hydroxylamine的含量与Enterococcus的相对丰度呈正相关,而与Phascolarctobacterium和Butyricicoccus的相对丰度呈负相关;在感染仔猪中,粪便中1,2,4-benzenetriol的含量与Bacteroides的相对丰度呈正相关,而粪便中oleic acid的含量与unidentified Ruminococcaceae的相对丰度呈负相关。综上所述,日粮中添加40 mg/kg GABA能促进断奶仔猪肠道中SIg A的分泌,增强仔猪肠道免疫屏障功能。SIg A分泌的增加可能与肠道微生物代谢变化,尤其是Enterococcus相关,但其具体机制有待进一步研究。
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