前言：肿瘤疫苗抗肿瘤作用的机理主要依赖于其中的肿瘤抗原，尤其是肿瘤特异性抗原发挥了重要作用。p53基因是肿瘤抑制基因的一种，其表达的正常蛋白少量存在于胞核内。p53基因突变存在于大约50％以上的人类各种恶性肿瘤中，而且p53基因的突变通常会导致肿瘤细胞中p53蛋白的过度表达，已在许多肿瘤患者血清中发现了抗p53抗体。来源于过度表达p53蛋白的肽可由MHC Ⅰ类分子递呈，于肿瘤相关表位发挥作用，诱导产生p53特异性的CTL反应；说明机体存在针对p53的B细胞和T细胞免疫反应。因此，p53蛋白可以作为肿瘤抗原进而成为肿瘤免疫治疗的靶标。 目的：为探讨p53基因修饰的U₁₄细胞瘤苗能否增强抗小鼠宫颈癌的主动免疫反应，本研究制备p53基因修饰的U₁₄细胞瘤苗并免疫小鼠，观察其对小鼠宫颈癌U₁₄细胞的细胞毒作用。 方法：以SDS-碱裂解法从扩增的Ecoli大肠杆菌中提取含wt-p53的质粒DNA，运用阳离子脂质体Lipofectin介导的转染方法，将p53基因导入U₁₄细胞，用含G418的选择性培养基对已转染细胞进行筛选，以获得稳定表达相应p53蛋白的U₁₄细胞，用间接免疫细胞化学方法检测p53蛋白的表达情况。采用反复冻融法制备肿瘤细胞瘤苗，然后观察经细胞瘤苗免疫后的小鼠脾细胞对U₁₄的细胞毒作用。实验分三组：p53-U₁₄细胞瘤苗组；U₁₄细胞瘤苗组；空白对照组。 结果：SDS-碱裂解法提取的质粒DNA通过限制性酶切分析表明，所提取的质粒DNA是含p53质粒DNA。阳离子脂质体Lipofectin可有效地将p53基因导入U₁₄细胞，通过用含G418的选择性培养基对已转染细胞进行筛选，获得了抗G418抗性细胞。间接免疫细胞化学方法检测发现：p53基因转染细胞中p53蛋白呈阳性表达，表现为细胞核着棕黄色：未转染细胞和阴性对照细