目的:低氧环境下,通过非细胞接触共培养自体髓核细胞与脂肪间充质干细胞,探讨髓核细胞与脂肪间充质干细胞间旁分泌下相互作用,为椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗提供新的细胞来源。方法:①250g雄性SD大鼠断颈处死,取腹股沟脂肪垫处脂肪,0.1%胶原酶消化,体外接种培养,采用极限稀释法纯化细胞。②利用流式细胞技术对细胞表面标记进行鉴定(Sca-1, CD44, CD45, CD11b)。③低氧环境下,自体髓核细胞与脂肪间充质干细胞按不同比率共培养。脂肪间充质干细胞在藻酸盐中培养,髓核细胞在培养皿底部培养。④两周后,细胞记数板检测髓核细胞增殖数量、RT-PCR检测髓核外基质表达;同时免疫组化和RT-PCR检测脂肪间充质干细胞外基质表达。结果:①共培养后,髓核细胞增殖明显,少量脂肪间充质干细胞作用髓核细胞即出现明显增殖;同时髓核细胞活性增强,细胞外基质Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)、聚焦蛋白聚糖(aggrecan)合成增加,差别具有统计学意义(P﹤0.01)。②免疫染色显示脂肪间充质干细胞外基质出现CollagenⅡ。RT-PCR结果证实,脂肪间充质干细胞中髓核细胞标志基因和软骨细胞标志基因的表达,实验组明显高于对照组,差别具有统计学意义(P﹤0.01)。结论:本实验初步探讨了自体髓核细胞与脂肪间充质干细胞间相互作用机制:①髓核细胞能促进脂肪间充质干细胞向髓核样细胞分化,且分化效率与髓核细胞数量相关;②脂肪间充质干细胞能促进髓核细胞增殖,同时恢复退变髓核细胞活性。为椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗提供新的细胞来源。