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目的:研究岩藻黄质诱导胃癌SGC7901细胞自噬与凋亡及其机制,并探自噬与凋亡的相互联系。方法:1、岩藻黄质对人胃癌SGC7901细胞活性的影响:培养人胃癌SGC7901细胞,岩藻黄质(0,6.25,12.5,25,50,100μM)分别处理12,24和48 h,采用MTT法检测岩藻黄质对人胃癌SGC7901细胞活性的影响。2、岩藻黄质对人胃癌SGC7901细胞自噬的影响:培养人胃癌SGC7901细胞,岩藻黄质(0,12.5,25,50μM)处理24 h,或以岩藻黄质(50μM)处理3,6,12和24 h。应用透射电镜法检测自噬泡随岩藻黄质剂量变化的发生情况,Real-Time PCR法检测Beclin1的m RNA表达变化,免疫荧光法和Western Blot法检测自噬标志性蛋白Beclin1与LC3的蛋白表达变化;3、岩藻黄质对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响:培养人胃癌SGC7901细胞,细胞分为正常对照组、岩藻黄质(50μM)处理3,6,12和24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Real-Time PCR法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和CC3的mRNA表达变化,免疫荧光和Western Blot法检测蛋白Bcl-2与CC3的蛋白表达变化。4、初步探讨岩藻黄质诱导人胃癌SGC7901细胞自噬与凋亡的相互联系:培养人胃癌SGC7901细胞,细胞分组为正常对照组,岩藻黄质(12.5,25,50μM,24 h)处理组组,+3-methvladenine(3-MA,5 mM,比岩藻黄质提前2 h加入细胞),+Z-VAD-FMK(20μM,比岩藻黄质提前2 h加入细胞),3-MA(5 m M,24 h),Z-VAD-FMK(20μM,24 h),采用Western Blot法分别检测自噬抑制剂和凋亡抑制剂对相关蛋白Beclin1,LC3,Bcl-2,CC3表达的影响。结果:1.岩藻黄质抑制人胃癌SGC7901细胞活性:MTT法结果显示岩藻黄质抑制SGC7901细胞活性具有时间-剂量依赖性,12,24和48 h岩藻黄质处理人胃癌sgc7901细胞的半数抑制率(ic50)分别为(22.09±0.57)μm,(16.27±0.47)μm和(9.80±0.94)μm。2.岩藻黄质可诱导人胃癌sgc7901细胞自噬:透射电镜结果显示,与对照组相比,岩藻黄质处理组中出现明显的自噬泡状结构,且随给药浓度的增大自噬泡积聚;免疫荧光结果显示,与正常组相比,岩藻黄质处理组中自噬标志蛋白beclin1和lc3表达均上调,且具有时间-剂量依赖性;real-timepcr实验结果显示,随给岩藻黄质药剂量增大和干预时间的延长,beclin1的mrna表达均增强,具有显著性差异。westernblot结果与免疫荧光结果一致,与正常组相比,岩藻黄质处理组中自噬标志蛋白beclin1和lc3表达均增加,且lc3ii/lc3i的表达在岩藻黄质处理3h后即有显著性变化。3.岩藻黄质可诱导人胃癌sgc7901细胞凋亡:流式细胞术结果显示,岩藻黄质可诱导人胃癌sgc7901细胞凋亡,且具有时间依赖性。与正常组凋亡率(13.8±2.6)%相比,岩藻黄质(50μm)干预12h和24h后,凋亡率显著增加,分别为(45.9±2.5)%,(84.7±3.7)%。real-timepcr法,免疫荧光法和westernblot结果显示,bcl-2的mrna和蛋白表达下调,而cc3的mrna与蛋白表达上调,在12h时效果差异最明显。4.岩藻黄质可能通过诱导人胃癌细胞sgc7901细胞自噬,促进凋亡:岩藻黄质可诱导sgc7901细胞发生凋亡,且具有时间依赖性。自噬抑制剂3-ma(5mm)能抑制岩藻黄质诱导的细胞凋亡,逆转岩藻黄质对beclin1、lc3、cc3和bcl-2的表达调控作用。而凋亡抑制剂z-vad-fmk(20μm)能抑制岩藻黄质诱导的胃癌sgc7901细胞凋亡,并逆转cc3、bcl-2的表达,但对自噬相关蛋白beclin1,lc3表达变化无统计学差异。上述结果显示,岩藻黄质促进sgc7901细胞自噬与凋亡可能存在相互关联,可能自噬发生在凋亡之前,促进了凋亡发生。结论:岩藻黄质明显抑制人胃癌sgc7901细胞活性。其可通过上调自噬相关基因beclin1和lc3的表达诱导胃癌sgc7901自噬,同时通过下调凋亡相关蛋白bcl-2的表达,上调cc3的表达诱导sgc7901细胞凋亡。且岩藻黄质诱导的sgc7901细胞自噬与凋亡可能存在相互关联,自噬的诱导可能启动凋亡。