利用人经血干细胞治疗小鼠早发性卵巢功能不全的作用研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lurenjia1983
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目的:早发性卵巢功能不全患者年龄小于40岁,月经稀发或停经常伴激素紊乱。然而,相关的病因与病理生理学机制仍然不明确。近年来,源于女性月经血的MSCs在生殖系统损伤修复中发挥出独特的作用,它具有来源广和无创性等优势。本项研究系统性地阐述了经血干细胞对早发性卵巢功能不全的修复作用。方法:收集健康育龄女性的月经血,通过密度梯度离心法分离出经血干细胞,均匀地培养于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养体系中,观察细胞的干细胞表型、细胞的形态及增殖特性。并采用CCK-8法绘制生长曲线,并检验经血干细胞的成骨、成脂与成软骨分化性能。在动物实验环节,小鼠分为三组,No组为空白对照组;Mo为环磷酰胺药物诱导早发性卵巢功能不全模型小鼠;Me组为早发性卵巢功能不全模型小鼠经经血干细胞治疗小组。造模诱导经细胞移植治疗后,收集小鼠卵巢、子宫、外周血等生物样本进行检测。整个实验过程中,记录小鼠动情周期、小鼠活产数以及卵泡计数。卵巢功能通过外周血激素水平、卵巢组织细胞凋亡情况。结果:在本项研究中,结果显示经血干细胞高表达经典的间充质干细胞表面标志物,低表达或不表达造血干细胞标记。经血干细胞能被诱导分化成脂、成骨以及成软骨。经过多代连续传代培养,经血干细胞依然能保持较好的增殖特性。在动物实验中,经血干细胞移植治疗后能增加小鼠卵巢重量。相较于Mo组而言,经血干细胞治疗后能部分改善小鼠的动情周期。此外,环磷酰胺造模后,小鼠的卵泡总数明显减少,经细胞移植后,小鼠的卵泡发育得到恢复与改善。Elisa结果提示,经血干细胞移植后能增加外周血E2与AMH激素的水平,降低小鼠外周血FSH水平。TUNEL实验提示,Mo组凋亡细胞数明显高于No组,经干细胞移植治疗后,卵巢组织凋亡细胞数减少。结论:经血干细胞在早发性卵巢功能不全的治疗中具有良好的应用前景,能从根本上改善和恢复卵巢部分功能。但是我们的研究集中在小鼠模型,需要进一步地在更高等的动物进行验证。需要指出的是,我们的研究取的是正常女性的月经血,在临床上早发性卵巢功能不全的患者往往都是月经稀发或停经的,需要通过人工周期获得月经血。因此,未来的应用中需要进一步研究比较正常周期的月经血与人工周期获得的月经血提取得经血干细胞在治疗早发性卵巢功能不全的疗效差异。同时,动物实验中还需增加足够长的随访时间以进行成瘤性等检验。总体而言,经血干细胞治疗早发性卵巢功能不全的作用是有效的。
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