卵透明带在一系列生殖事件中都起着至关重要的作用，所以ZP蛋白一直是生殖免疫避孕疫苗的理想靶抗原和生殖生物学中研究精卵识别机制的重要实验材料。本实验室已构建并利用毕赤酵母表达重组人卵透明带蛋白-3（rhZP3）。因此，本课题的主要目的是通过监测目的蛋白回收率及纯度两个关键因素，确定最佳pH值、上样流速、螯合离子、洗脱液等纯化条件，通过优化纯化条件获得纯rhZP3作为透明带抗体检测和免疫避孕研究的抗原。 发酵液上清经超滤浓缩去除杂质后在不同pH值、上样流速、螯合离子等条件下进行金属螯合亲和层析，咪唑洗脱液洗脱目的蛋白，冷冻干燥后通过SDS-PAGE电泳及Western-Blotting鉴定纯化的目的蛋白回收率、纯度。以纯化的rhZP3作包被抗原，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测90份不孕妇女血清样品，并将其检测结果与天然纯化猪ZP3（pZP3）制备的人透明带抗体ELISA检测试剂盒的检测结果相比较。 实验结果表明，随着pH值升高，亲和柱结合的总蛋白量增加，但目的蛋白量及其纯度下降；上样流速增大时，蛋白回收率下降，而纯度逐渐提高；镍离子柱结合目的蛋白较铜离子多，且纯化后纯度较好；穿透峰重复上样可提高目的蛋白回收率，通过NH4Cl洗去杂蛋白可提高目的蛋白纯度。通过条件优化，可使目的蛋白回收率达到85％以上，纯度达到90％以上。利用rhZP3检测不孕妇女血清透明带抗体结果与用纯化猪ZP3抗原制备的透明带抗体ELISA检测试剂盒的检测结果相似。 本研究通过实验证明重组蛋白rhZP3纯化的最佳条件为：在pH7.5缓冲系统中以2ml／min的流速上样到镍离子柱中，以0.5mol／L NH4Cl溶液洗脱杂蛋白，0.1mol／L咪唑洗脱目的蛋白。rhZP3与猪ZP3在透明带抗体ELISA检测方面有着相同的效果。