海蓬子标准组分制备及其物质基础研究

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本文首次对北美海蓬子的标准组分进行了提取分离,建立了一套系统提取分离海蓬子组分的标准方法和标准组分库;主要运用高效液相色谱技术对提取分离所得到的标准组分进行了高效液相色谱分析;对标准组分的抗凝活性、抗氧化活性进行了研究。为海蓬子的相关活性研究以及在药物、保健品方面的研究开发提供了物质基础和技术经验。提取部分采用速度快、提取效率高的超声波辅助溶剂提取法。水溶性组分针对多糖进行提取,分别采用超声辅助水提、超声辅助碱提以及超声辅助酶提三种方法进行提取,对水提组分和酶提组分直接冻干,碱提组分醇沉干燥得到粗多糖。其他提取组分分别用95%乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚等不同极性溶剂,超声波辅助溶剂提取,蒸干即得标准组分。水溶性组分和石油醚组分不再进行分离。乙醇提取组分采用溶剂分配法进行分离,先后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,蒸干得到溶剂分配组分。乙酸乙酯提取组分和氯仿提取组分则分别用硅胶柱进行分离,得到硅胶柱分离组分。以上组分共同构成了海蓬子标准组分库,共得到29种标准组分。对组分进行化学分析以研究其物质基础,本实验主要采用高效液相色谱法(HPLC)对29种标准组分进行分析。按照文献中已有的单糖组成分析方法,对3种粗多糖成分进行单糖组成研究,水解衍生后进行HPLC分析,用乙腈-水作为流动相进行分析,得到分离效果好的液相图谱。其他26种组分建立统一的液相方法进行分析,并用紫外串联蒸发光散射检测器(DAD-ELSD)进行检测,流动相为甲醇-水体系,得到分离效果好的液相图谱。对提取标准组分进行部分药理活性研究,主要包含:1、体外抗凝血活性研究,利用APTT试剂盒测定活化部分凝血活酶时间,并用肝素钠作为阳性对照。结果发现,北美海蓬子水溶性组分、乙醇提取组分、乙酸乙酯提取组分、氯仿提取组分和石油醚提取组分均未明显延长凝血时间,表明其无明显抗凝血活性。因此,本实验不再对分离组分进一步研究。2、抗氧化药理活性研究,分别采用·DPPH自由基清除实验、水杨酸法羟基自由基(·OH)清除实验以及邻苯三酚自氧化法超氧自由基(·O2-)清除实验研究组分抗氧化活性,并用L-抗坏血酸(VC)或丁基羟基茴香醚(BHA)作为阳性对照。结果发现,北美海蓬子各极性提取标准组分均有明显的抗氧化活性,但清除效果均弱于阳性对照。其中,组分对·OH自由基有明显清除活性,在8mg/mL浓度时抑制率均低于80%;浓度为5mg/mL的各组分对·DPPH自由基的清除率均在80%以上,其中活性最强的为95%乙醇提取组分;各提取组分未表现出·O2-清除活性,对邻苯三酚自氧化具有促进作用。
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