动物组织中微量糖链结构分析方法的建立及应用

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jackywang1980
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文以C57BL/6J小鼠肝脏、肾脏及心脏为研究对象,运用多种现代提取分离与分析技术,建立了一种系统分析微量组织中神经节苷脂(ganglioside, GLS)、N-糖链及糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAGs)的分析方法,并将所建立的方法首次应用于人宫颈癌细胞(HeLa)中N-糖链和2型糖尿病小鼠(db/db)肾脏中GAGs组成及其精细结构差异性研究。在此基础上,以所得内源性糖链和外源性海洋糖链为原料,利用糖生物芯片技术,首次研究了GLS及海洋拟寡糖脂(NGLs)与甲型流感病毒(influenza A virus, H1N1)神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的结合作用,探讨和分析了内源性GAGs和海洋酸性多糖与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)的结合特性。得出的主要结论如下:(1).利用高效薄层色谱(HPTLC)和电喷雾质谱(ESI-MS)联用技术,建立了一种可适用于不同组织中微量GLS组成的快速分析方法。以C57BL/6J小鼠肝脏、肾脏和心脏组织为研究对象,首次对其组织中GLS进行比较分析。结果表明,不同组织来源的GLS的种类及组成存在较大差异。C57BL/6J小鼠肝脏中以GM1和GM2为主,心脏中主要含GM1、GM2和GT1a,而肾脏中5种GLS(GM3、GM2、GM1、GD1a和GT1a)含量差异不大。肝脏中GLS的种类和含量最多,与其作为脂类代谢的主要器官有关。(2).以C57BL/6J小鼠肾脏为研究对象,建立了一种从同一组织中分步释放微量N-糖链和GAGs的方法。研究表明,C57BL/6J小鼠肾脏中主要是硫酸乙酰肝素(heparan sulfate, HS)。N-糖链轮廓分析表明,小鼠肾脏有60种复杂多样的N-糖链,其中高甘露糖型所占比例较大,多数N-糖链含有乙酰神经氨酸(NeuAc)和岩藻糖(Fuc)。利用所建立的N-糖链分析方法,首次全面分析了HeLa细胞膜表面N-糖链的结构。在获得的34种N-糖链中,除存在高甘露糖型N-糖链,二天线、三天线、四天线和五天线等复杂型N-糖链外,还发现了与肿瘤发生和转移相关的平分型和Lewis糖链结构。(3).建立了一种适用于动物组织中微量GAGs精细结构分析方法,并将其应用于2型糖尿病小鼠肾脏组织中GAGs的精细结构差异性分析。采用2-氨基吖啶酮(2-aminoacridone,2-AMAC)荧光标记柱前衍生高效液相色谱法,比较分析了C57BL/6J正常组小鼠,db/db糖尿病模型组小鼠和海洋寡糖药物HS203给药组小鼠肾脏中GAGs的种类及二糖组成结构差异性。首次发现db/db糖尿病组小鼠肾脏中HS较正常组N-硫酸化程度降低,而海洋寡糖药物HS203可显著提高病变组肾脏中HS硫酸化程度,表明HS203具有治疗糖尿病肾病作用。(4).利用寡糖芯片技术,首次比较分析了6种内源性GLS及36种海洋红藻来源拟寡糖脂与甲型流感病毒NA的特异性结合作用。结果表明,36种海洋来源的不同类型的卡拉胶寡糖及琼胶寡糖与NA蛋白的结合强度绝大多数都强于内源性GLS,且这种结合强度与寡糖硫酸根的有无、糖残基种类、连接方式及聚合度大小等相关。(5).利用多糖芯片技术,首次探讨了内源性GAGs和海洋酸性多糖与2型糖尿病肾病相关因子CTGF的结合作用,并发现硫酸化程度和糖醛酸含量是影响CTGF与硫酸乙酰肝素类多糖识别的关键因素。综上,通过动物组织中GLS、N-糖链及GAGs快速分析方法的建立及该方法的成功应用,一方面可为糖组学研究提供了可靠方法,有利于寻找新的疾病标志物,并为疾病的早期诊断治疗提供新的途径;另一方面,将有利于从GAGs细微结构的改变上评价药物的有效性,并有利于阐释糖链在相关疾病发生发展的生物学作用,并为以此开发相关糖类药物提供方法学基础。
其他文献
信息安全处于快速发展的状态,信息安全企业的项目管理问题也日益受到相关工作者的关注。信息安全产品的研制具有很强的专业性,区别于其他行业的产品。所有通用的项目管理体系框架及管理流程很难直接使用于信息安全企业的项目管理。本次论文的研究主要是根据信息安全管理方面的内容展开讨论,对于怎样可以再次方面的内容展开研究和讨论。第一根据相关的研究理论来进行阐述和分析,然后根据相关的项目流程以及别的方面的内容展开讨论
随着对主动脉夹层的深入认识,近年来主动脉夹层的治疗方式也得到了飞速的发展,从以前的单一传统手术向腔内修复术的转变,进而向结合两者优势的“杂交手术”转变,使得传统开胸
李贺诗风独标,特以鬼仙诗称著。其鬼诗,虽言凄厉,却有一种皈依感充盈其间,而其仙道诗,表面瑰颖,内里却沉潜着虚无与幻灭。本文拟通过品读李贺鬼诗和仙道诗的不同意蕴,探解李
本文分析了苏州市区河网水体污染现状和大运河改道对苏州市河网水量、水质的预断影响。同时考虑到苏州市的气侯条件和地理环境等诸要素的影响,以苏州市区河网水体污染的转移
西方国家公共管理社会化的主要经验是:重视市场机制的作用、突出社会中介组织的职能以及由此所导致的政府管理理念、组织结构与管理手段方式的深刻变化。我国政府应顺应社会发
利用主成分分析方法对滁州市各个县、市、区2013年的综合经济实力进行比较研究,提出用贝叶斯分位数回归刻画每一指标因素在不同分位点处对综合经济实力的影响。实证结果显示,
<正>本文深入浅出地讲解分析实验中的各种问题,如对分析值误差的理解、检量线的意义、高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)定量法、高效阴离子变换色
云水谣景区,依托2008年列入“世界文化遗产名录”的和贵楼和怀远楼,用十一年的时间将一个以种植茶叶为生的小村庄,发展成为了闻名世界的国家AAAAA级风景名胜区。从云水谣采集