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脂肪细胞中甘油三酯的水解作用是机体能量代谢的核心反应。脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)是近年来发现的水解甘油三酯为甘油二酯的关键限速脂酶,其在动物体内的表达和活性受激素、细胞因子和脂解通路的多种因素调控。异丙肾上腺素(ISO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)均能够影响ATGL的表达,显著刺激鼠类与人脂肪细胞甘油三酯水解。猪是体脂沉积能力最强的肉用家畜,与啮齿动物相比,其脂肪沉积模式与人更为接近,可作为与ATGL相关的肥胖、糖尿病、脂肪肝等代谢疾病研究的理想动物模型。然而,ISO和TNF-α对ATGL在猪脂肪细胞中的表达调控目前尚未见报道。本研究以猪原代培养的成熟脂肪细胞为研究对象,加入外源ISO、TNFα及其PKA、p38MAPK和p42/44 MAPK通路抑制剂处理脂肪细胞;使用试剂盒检测甘油和游离脂肪酸释放量;利用RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光染色法、免疫共沉淀等方法,以及构建ATGL慢病毒干扰载体感染猪脂肪细胞等手段,分析和阐明ATGL的表达对ISO与TNFα的调控响应及其分子机制,取得以下主要结果:1. ISO和TNFα分别以时间和剂量依赖的方式促进了猪脂肪细胞的脂肪水解作用,这一过程伴随着ATGL表达量的下调;PKA通路抑制剂和p42/44 MAPK在一定程度上分别显著抑制了ISO和TNFα对ATGL表达量的下调作用,而p38MAPK通路抑制剂却未表现出这种作用。2.采用DNA测序、质粒重组与包装、感染293T细胞,获得绿色荧光蛋白的表达,测定病毒滴度为1×108 TU/mL,表明了慢病毒包装的成功。慢病毒载体干扰了ATGL的表达,降低了猪脂肪细胞的正常培养状态、ISO和TNFα刺激下的甘油和游离脂肪的酸释放量,甘油和游离脂肪酸并未以1:3的比例减少;ISO和TNFα刺激明显减弱了ATGL缺失所引起的抑制脂解作用。3.猪脂肪细胞常规培养条件下, CGI-58可以分别与ATGL和perilipin直接结合,ATGL和CGI-58共同定位在猪脂肪细胞中脂滴周围。ISO的刺激增强了ATGL与CGI-58的相互作用;减弱CGI-58与perilipin的结合;ATGL和CGI-58对ISO的刺激响应是一致的,均向细胞质中扩散。综上所述,ATGL是猪脂肪细胞中的重要脂酶,ISO和TNFα对脂肪的刺激作用依赖于ATGL的参与,异丙肾上腺素和TNFα显著下调猪脂肪细胞ATGL的表达。PKA通路和p42/44 MAPK通路分别参与了ISO和TNFα对ATGL表达的下调作用。ISO通过调节ATGL与CGI-58的相互作用实现脂解的调控。