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胃癌是指发生在胃上皮组织的恶性肿瘤。据统计,全球每年新发胃癌80余万例,占所有新发癌症的9%,仅次于肺癌、乳腺癌和肠癌,居第4位,每年有60余万人因胃癌死亡,居癌症死因的第2位。早期胃癌预后较好,5年生存率可达90%以上。而病变侵及肌层者,术后5年存活率则为40%-50%：病变侵及浆膜或以外,术后5年生存仅10%,因此胃癌的辅助化疗占有重要地位。国内的回顾性研究表明,我国大部分患者在诊断胃癌时已为进展期,早期胃癌的诊断率低于10%。目前临床上胃癌的治疗采取以手术治疗为主,辅以化疗、放疗、生物治疗等综合治疗手段,一旦发现周围侵犯或转移,手术往往为姑息性,化疗为主的综合治疗成为首选的治疗方案,以期改善患者的生活质量,延长患者的生存时间。自60年代,氟尿嘧啶(5-Fu)开始用于胃癌的治疗,经过40余年的发展,胃癌的一线联合化疗方案经历了FAM→FAMTX→FP→ECF的演变,其中,5-FU是一线化疗方案中的经典和基础药物。然而因肿瘤的原发或继发性对化疗药物的不敏感而导致的耐药问题常常影响化疗效果,化疗的总有效率在20%-58%,晚期胃癌患者中位生存时间不超过10个月。肿瘤耐药成为临床最常见而又最难解决的问题之一。肿瘤耐药机制问题的研究任重而道远。Micro-RNA是在真核生物中发现的一类进化上高度保守的约22nt非编码小RNA,其通过下调靶基因的表达或抑制其翻译而参与调节细胞的发育、增殖、分化、凋亡。Micro-RNA具有癌基因和抑癌基因的作用,与消化道肿瘤的发生发展、浸润转移和治疗密切相关。最新研究发现micro-RNA与包括胃癌在内的众多肿瘤的耐药性密切相关,为肿瘤耐药的研究提供了一个新的方向。第一部分人胃癌5-氟尿嘧啶SGC-7901/5-FU耐药细胞株的建立目的：建立胃癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株SGC-7901/5-FU,并对其生物学特性进行研究。方法：采用浓度梯度递增法建立胃癌5-氟尿嘧啶SGC-7901/5-FU耐药细胞株；用细胞记数法描绘耐药细胞株和亲代细胞株的生长曲线和群体倍增时间；用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测该耐药细胞株对多种临床常用抗肿瘤药物的耐药特性；Western-blot检测耐药细胞和亲本细胞内P-ga的表达；Real-time PCR检测MDRP(多药耐药蛋白)mRNA的表达。结果：历时8个月建成胃癌SGC-7901/5-FU耐药细胞株；耐药细胞株比亲代细胞株增殖减慢,倍增时间比亲代细胞株延长5.7小时；耐药细胞株对5-FU的耐药倍数为9.86,且对多西他赛、顺铂、阿霉素的敏感性降低；耐药细胞株表达P-ga,而亲代细胞则不表达；耐药细胞株中MDRP多药耐药蛋白)mRNA的表达是亲本细胞株的18倍。结论：本实验成功的建立了胃癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株SGC-7901/5-FU,其生物学特性不同于亲代细胞株SGC-7901,具有耐药细胞株的基本生物学特性,可用于下游实验。第二部分基因芯片检测亲本细胞SGC-7901和耐药细胞SGC-7901/5-FU的Micro-RNA的表达谱目的：分析人胃癌亲本细胞SGC-7901和耐药细胞SGC-7901/5-FU的Micro-RNA的表达谱,研究筛选出有表达差异的micro-RNA.方法：应用micro-RNA芯片进行表达谱分析；采用实时荧光定量realtime-PCR验证基因芯片的结果。结果：人胃癌亲本细胞株SGC-7901和SGC-7901/5-FU耐药细胞株的Micro-RNA的表达谱存在差异,与亲本细胞株相比,SGC-7901/5-FU耐药细胞株中表达上调2倍以上的Micro-RNA有：microRNA190、 microRNAl42-5p、microRNA668、microRNA501-5p;表达下调2倍以上的Micro-RNA有：(?)nicroRNA197、microRNA210.实时荧光定量realtime-PCR验证的结果与基因芯片一致。结论：SGC-7901/5-FU耐药细胞的多药耐药特性可能与micro-RNA表达谱的改变有关,为解决肿瘤化疗的多药耐药性提供新的研究方向。