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对肥胖以及脂肪沉积机理的研究具有重要理论与现实意义;对于人类来讲,肥胖与多种疾病相关并严重影响人们的身心和心理健康;对于农业动物,肥胖则导致饲料转化率的下降、肉品质的降低及可食部分的减少,另外对动物肥胖分子机制的研究可以为人类肥胖的研究提供有益的动物模型。UCP是分布于线粒体内膜的质子转运体,能够将氧化呼吸产生的能量以热量的方式散发从而调控能量代谢,已有多个证据表明UCP基因部分解释了肥胖产生的原因。本研究利用PCR-SSCP、直接测序和PCR-RFLP的方法检测到UCP基因的多个SNPs,在中国地方鸡种、AA肉鸡和海兰蛋鸡中进行UCP基因SNPs的群体遗传学分析;针对不同群体(中国农大F2资源家系和东北农大肉鸡高低脂双向选择品系)的特点建立合适的统计分析模型,进行UCP基因SNPs与生产性状的相关分析。利用RT-PCR和Northern Blot的方法检测了UCP基因在鸡心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃、小肠、脑、肌肉、脂肪10种组织中的表达情况。在AA肉鸡和海兰蛋鸡中分别进行肉鸡料和蛋鸡料的饲养试验,于1日龄,2、4、6、8、10周取各组织样;随机取6只7周龄AA肉鸡分为两组,试验组注射胰岛素,对照组注射等剂量的生理盐水,连续注射4天后屠宰取样;以鸡GAPDH基因作为内源对照,利用RT-PCR的方法测定了不同处理组骨骼肌中UCP基因的mRNA表达水平;克隆测序了鸡UCP基因的5个内含子序列,并用UCP基因的cds区域、内含子2和内含子3序列构建了系统发生树。结果表明: (1)在UCP基因不同区域总共发现7个SNPs,分别是3’-UTR区域的C1351T、G1412A、C1191T、A1197C,内含子2区域的C1240A和C883A(Accession No.AF433170);Exon2区域的T660C(Accession No.AF287144)。 (2)3’-UTR的四个突变位点在各品种中的群体遗传学分析结果表明,C1351T和G1412A突变产生的三种基因型的频率在北京油鸡与白耳鸡、石岐杂、蛋鸡间的差异极显著(P<0.01);C1191T突变产生的基因型的频率,在北京油鸡与蛋鸡、白耳鸡间的差异极显著(P<0.01),在AA肉鸡与白耳鸡、石岐杂间差异显著(P<0.05);A1197C突变,除北京油鸡与AA肉鸡间,白耳鸡和蛋鸡间外,在各品种间差异极显著(P<0.01)。 (3)不同群体中UCP基因的SNPs与生产性能的相关分析表明,UCP基因对鸡的肥度性状、体重、肝脏重等多项生长和体组成性状有影响。在F2群体中C1351T和G1412A突变产生的三种基因型间的肝重、肝率、肝脏重/屠体差异显著(P<0.05),AB基因型个体的肝重、肝脏重/屠体重最大,显著大于AA和BB基因型个体,BB基因型个体的肝率显著小于AA和AB基因型个体。在第五、第六世代中的肉鸡腹脂双向选择品系中A1197C突变产生的HH、HI、II三种基因型间腹脂重、腹脂率差异显著(P<0.05),H基因型个体的腹脂脂和腹脂率显著低于于HH和HI基因型个体;在第五世代中,II基因型个体的肝脏重显著大于HI基因型个体;在中国农大F2资源家系中,HH,HI,II基因型个体间6-10周龄体重差异极显著(P<0.01),HH与HI基因型个体的6-10周龄体重明显较大。第六世代中的肉鸡腹脂双向选择品系中内含子2区域的C1240A产生的三种基因型个体间活重、屠体重、肝重、肌胃重差异显著(P<0.05),MM、MN基因型个体的活重和屠体重显著大于NN基 东北农业大学农学博士学位论文一因型个体(P<0.05);不同基因型对活重和屠体重的加性效应分别达到了和64.ig和509。第六世代中的肉鸡腹脂双向选择品系中外显子2上T660C产生的三种基因型个体间的脾脏重差异显著,*o基因型个体的脾脏重显著大于*P基因型和PP基因型的个体(P<o,05)。 (4)RTPCR和 Northern杂交的结果都表明,鸡的 UCP基因只特异性在骨骼肌表达。 (5)UCP基因的表达在蛋鸡和肉鸡中存在差异,饲喂不同能量水平的饲料能够彤响 UCP基因在肉鸡、蛋鸡中的表达。l日龄时肉鸡UCP基因的表达水平高于蛋鸡,第6周以后发现蛋鸡的UCP基因表达水平高于肉鸡;随着周龄的增加,鸡UCP基因的表达呈下降趋势;对于肉鸡,与饲喂蛋鸡料相比,饲喂肉鸡料时UCP基因表达水平在各周龄均较高,而在蛋鸡中则观察不到这样的规律。同样饲喂肉鸡料的肉鸡和蛋鸡,6周龄以后,蛋鸡中的UCP基因表达水平高于肉鸡;同样饲喂蛋鸡料的肉鸡和蛋鸡中,各周龄都是蛋鸡UCP基因的表达高于肉鸡。 (6)外源胰岛素处理能够提高 UCP基因的表达水平。 (7)克隆测序了鸡UCP基因的5个内含子,其长度分别为126,534,576,79,92hp,鸡UCP基因至少包括6个外显子。以*s序列构建的基因进化树与物种进化树一致。