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目的探讨外源多巴胺对α-Synuclein过表达多巴胺能神经元细胞功能的影响,为阐明“左旋多巴/多巴胺治疗是否会加速帕金森病病情进展”提供体外实验依据。方法(1)构建帕金森病体外细胞模型:利用脂质体将野生型α-Synuclein-pcDNA3.1重组质粒转染多巴胺能细胞系SK-N-SH,通过G418筛选获得稳定克隆,并通过RT-PCR和Western blot鉴定目的基因α-Synuclein在细胞中的转录和表达水平。(2)观察过表达α-Synuclein对SK-N-SH细胞功能的影响:分别以α-Synuclein-pcDNA3.1重组质粒和pcDNA3.1空载体转染的细胞株作为实验组和对照组,通过MTT法、比色法、流式细胞术、RT-PCR和Western blot分别比较两组细胞生长曲线和生长活性、MDA含量、早期凋亡率、凋亡相关基因Caspase-3、P53、Bcl-2、Bax和氧化应激相关基因SOD1、SOD2、CAT的转录水平及Caspase-3、P53、Bcl-2、Bax的表达水平。(3)观察添加外源多巴胺对α-Synuclein过表达SK-N-SH细胞功能的影响:以不添加DA的细胞株为对照组,按添加多巴胺的终浓度值将实验组分为50 uM DA组、100 uM DA组、300 uM DA组和500 uM DA组。通过MTT法、比色法、流式细胞术、RT-PCR和Western blot分别比较各组细胞活性、MDA含量、早期凋亡率、凋亡相关基因Caspase-3、P53、Bcl-2、Bax和氧化应激相关基因SOD1、SOD2、CAT的转录水平及Caspase-3、P53、Bcl-2、Bax的表达水平。结果(1)帕金森病细胞模型的构建:α-Synuclein-pcDNA3.1重组质粒成功转染SK-N-SH细胞系,通过350 ug/ml的G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR和Western blot结果表明目的基因α-Synuclein在α-Synuclein-pcDNA3.1重组质粒转染组的转录和表达水平均高于pcDNA3.1空载体转染组,证实稳定表达野生型α-Synuclein的细胞模型构建成功。(2)过表达α-Synuclein对SK-N-SH细胞功能的影响:MTT法显示实验组较对照组细胞生长缓慢、活性下降;比色法测定吸光度显示实验组细胞匀浆MDA含量高于对照组;流式细胞术显示实验组细胞早期凋亡率高于对照组;RT-PCR显示基因Caspase-3、P53、Bax、SOD1、SOD2和CAT在实验组的转录水平高于对照组、基因Bcl-2在实验组的转录水平低于对照组;Western blot显示Caspase-3、P53和Bax在实验组的表达水平高于对照组、Bcl-2在实验组的表达水平低于对照组。(3)外源多巴胺对α-Synuclein过表达SK-N-SH细胞功能的影响:随着外源多巴胺添加浓度的递增,MTT法显示细胞活性递减;比色法显示细胞匀浆MDA含量递增;流式细胞术显示细胞早期凋亡率递增;RT-PCR显示基因Caspase-3、P53、Bax、SODl、SOD2和CAT的转录水平递增、基因Bcl-2的转录水平递减;Western blot显示Caspase-3、P53和Bax的表达水平递增、Bcl-2的表达水平递减。结论(1)过表达野生型α-Synuclein增强SK-N-SH细胞内氧化应激水平,加速细胞凋亡。(2)添加外源多巴胺增强α-Synuclein过表达SK-N-SH细胞内氧化应激水平,加速细胞凋亡,且这种效应呈剂量依赖性。(3)体外实验提示应用左旋多巴/多巴胺治疗帕金森病改善患者运动症状的同时,亦有可能对黑质残存多巴胺能神经元产生毒性作用而加速病情的进展。