本文以当前培育超级杂交稻正在广泛使用的两个优势亲本培矮64S和9311作为主要研究对象，对影响其成熟胚来源的愈伤组织诱导、分化和植株再生条件进行了优化；对影响农杆菌转化上述籼稻的条件进行了探索和优化；建立了高频的离体再生系统和比较高效的遗传转化方法。同时对转基因植株进行了分子检测和抗虫性分析。 1．培矮64S和9311离体再生系统的优化 研究了影响两种籼稻愈伤组织诱导、继代和分化成苗的相关因素，结果表明：种子本身的生理状态是影响愈伤组织诱导频率的主要因素之一；将N6培养基的大量元素与MS微量元素组合，同时提高VB1和肌醇的含量可显著提高愈伤组织的诱导和培养效果；在合适的2,4-D浓度下，添加其他外源激素不能显著提高愈伤组织的诱导率，但可改善愈伤组织的胚性生长状态；交替使用不同的培养基成分和激素浓度配比可使长期继代培养物保持胚性状态，延长继代培养的时间；预分化和干燥处理使植株再生的频率和质量大大提高。 采用我们优化后的培养条件与处理方式，培矮64S和9311愈伤组织的诱导频率分别可达到62.45％和85.30％；继代培养时间达三个月左右仍能保持较好的胚性生长状态；对于继代两次胚性生长状态良好的愈伤组织分化频率分别可达到85.5％和87.7％。 2．采用农杆菌介导法将Bt毒蛋白基因导入水稻 同样以上述两种籼稻为主要研究材料，比较了分别以预培养的幼胚和幼穗、幼胚、成熟胚来源的愈伤组织作为转化受体的愈伤组织转化频率，结果表明预培 养4～6天的幼胚最适宜作为农杆菌介导转化的受体；其次是来源于幼胚和成熟胚 的生长状态良好的胚性愈伤组织。 以 YEB培养基作为共培养培养基，对于农杆菌 EHA 05…Ub．m）来说，菌 液浓度为OD值一0．8时，愈伤组织的转化率最高。 在农杆菌侵染愈伤组织过程中，通过负压处理可明显提高水稻愈伤组织的转 化频率。对于60ml的注射管而言，抽拉距离确定在6cm左右，抽拉次数40次 对提高水稻愈伤组织的转化频率最为有效。 采用CaZ＋和表面活性剂处理以提高转化频率是本实验的重大创新。在愈伤 组织浸染后，分别以浓度为20mmol／L和30mmol／L的CaC12的溶液处理培矮645 和 93if胚性愈伤组织，同时在处理液中添加 0．l％Tween20以降低细胞的表面张 力，对促进愈伤组织的转化和转化植株的再生效果最好。经上述处理可使 93 愈伤组织的转化率和抗性植株再生率分别达到58．33％和33．33％。 选取部分植株进行PCR分析、DNA点杂交、PCR－Southern杂交。以上分子 检测结果表明，绝大部分经抗性筛选得到的转化植株的基因组中已整合有外源基 因。