香樟是我国南方地区重要的特种经济树种,因其木质中含有特殊的抗性成分而广泛应用到家具、食品、日用化妆品、农业及医药等行业。香樟精油是从香樟组织中提取的一种多组分芳香性物质,其中的主要成分有芳樟醇、樟脑、1,8-桉叶油素、龙脑、松油醇、石竹烯和柠檬烯等化合物,是香樟抗菌、抗氧化、消炎和杀虫驱蚊等生物抗性作用形成的主要原因。香樟内生菌是香樟活立木中微生态系统的重要组成部分,可参与香樟组织的次生代谢过程,能通过协同代谢作用对香樟代谢产物进行辅助合成或修饰,从而改变香樟组织中代谢物质的结构和性质。本研究意在探究香樟内生菌代谢产物对香樟精油组分的抗菌和抗氧化活性的影响,解析其中的改性方式和作用机制,建立可人为调控的香樟精油组分活性改良的研究策略,以期获得性能更好的天然抗性物质的生产过程,为香樟及香樟精油产品的深度开发提供科学依据。研究取得了以下主要结果:1.构建了一种能从多年生难消毒的活体木本组织中高效率分离出植物内生菌的复合消毒实验操作方法。实验从香樟的根须、木韧部和叶片等组织中分别分离纯化出11株香樟内生真菌。建立了适用于根须、叶片组织和木质部消毒的活体消毒方法。2.量化分析了香樟精油抗菌和抗氧化活性的性能,建立了香樟精油抗性活性指数。实验显示:香樟精油对敏感真菌的最小抑制浓度(MIC)为6.25%,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC分别为12.5%和6.25%;6.25%的香樟精油对DPPH自由基的清除率可达50%以上,而12.5%浓度的精油能有效清除?OH自由基。3.探究了内生真菌促进香樟精油组分抗性转化的作用方式和机制,为精油组分的抗性改良提供了操作依据。实验从分离的香樟内生真菌中筛选确认了其中的Endophyte X4菌株对香樟精油抗菌和抗氧化活性的增强作用是通过其代谢产物?-葡萄糖苷酶对香樟抗性物质结构的转化或修饰实现的。该内生菌株被鉴定为绿色木霉菌(Trichoderma viride)。4.通过响应面分析法等实验设计优化了内生真菌Endophyte X4产?-葡萄糖苷酶的发酵培养基及发酵条件,提高了内生菌代谢物质对精油组分作用的效能。结果表明:产酶培养基优化组分为:牛肉膏22.5 g/L、磷酸氢二钾0.998 g/L、酵母粉1.231 g/L、葡萄糖30 g/L、硫酸锌0.03 g/L、硫酸铵3 g/L、硫酸亚铁0.06 g/L;产酶发酵优化条件为:培养温度25℃、接种量60 mm~2菌苔/250 m L、种龄3天、装液量50 m L。优化后可使产酶活力提升了33.2%。5.验证了来源于香樟内生真菌Endophyte X4的?-葡萄糖苷酶与普通商品葡萄糖苷酶对香樟精油组分的抗性改良的差异;优化了内生真菌产酶对香樟精油抗性改变的转化反应条件。结果表明:(1)粗酶液在45℃下转化10%的精油15 min后其抗DPPH自由基的活性提升42%;(2)粗酶液在50℃下转化7.5%的精油30 min后其抗?OH自由基的活性提升29%;(3)粗酶液在50℃下处理12.5%的精油30 min后其抗敏感真菌的抑菌率提高了76%;(4)粗酶液在50℃下处理12.5%的精油30min后其对金黄色葡萄球菌抑菌圈增加了7.3 mm,MIC降低了62.6%;(5)粗酶液45℃下处理10%的精油45 min后其对大肠杆菌抑菌圈增加了13.9 mm,MIC降低了61.9%。实验还探究了内生菌产酶对香樟精油主要成分作用的初步机理。综上所述,本研究通过筛选特定的香樟内生真菌对香樟精油组分进行生化修饰转化,能显著提高精油的抗菌和抗氧化作用。依据优化的实验条件利用内生菌与香樟代谢产物的协同作用可以更好地发挥香樟组分的生物抗性,提高精油的抗性效果,为开发更为优良的天然抗性产品提供了技术路线。