葡萄糖氧化酶产生菌的诱变育种及条件优化

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葡萄糖氧化酶(GOD)能够把葡萄糖转化成葡萄糖酸和过氧化氢,所以它可以改善面粉的质量,诊断血糖,防腐保鲜等功能。在自然界中,微生物的繁殖速度是非常快,在繁殖的过程中,就可以产生我们所需要的一些东西,所以我们产葡萄糖氧化酶(GOD)的微生物菌株选用了黑曲霉菌株。本课题利用初始产量为1.5U/mL黑曲霉菌株为起始菌株,利用各种诱变方法,包括紫外线诱变方法和微波诱变方法两种物理诱变方法和硫酸二乙酯方法一种化学诱变方法,经过诱变我们最终得到一株产葡萄糖氧化酶(GOD)量36.78U/mL黑曲霉诱变菌株。然后在此菌株的基础上,制备原生质体,再通过热灭火和紫外灭火之后,进行细胞融合,得到产葡萄糖氧化酶(GOD)48.93U/mL的融合子GODUMD7,并将此菌株初步命名为黑曲霉GODUMD7,经过遗传十代对其稳定性能检测,酶活稳定。后来我们又用单因素和响应面条件优化设计方法进行安排设计实验,优化出的最佳培养基组成为蛋白胨0.4%,硫酸铵0.8%,葡萄糖5%,碳酸钙2%,硫酸镁0.05%,磷酸二氢钾0.4%,氯化钾0.05%,且预测的酶活力为53.365U/mL,最后经过实验验证最终此菌株的酶活产量恒定在55U/mL左右。经过对黑曲霉菌株GODUMD7产葡萄糖氧化酶(GOD)的发酵条件优化,把发酵条件定为每250mL的三角瓶中的装液量为40mL,初始培养基pH为6.0,接种量控制在4%左右,然后发酵42h,在此条件下培养黑曲霉菌株GODUMD7,它的最终产酶量为63U/mL,这比原始菌株高出多达41倍。最后对黑曲霉菌株GODUMD7产的葡萄糖氧化酶(GOD)特性进行了简单研究,确定产酶最适温度为40℃和最适pH为5.0,且此酶属于低温酸性酶。
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