巴戟天中主要环烯醚萜苷的研究

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环烯醚萜苷类化合物,在巴戟天中含量丰富,具有明显的抗炎镇痛作用,是与巴戟天祛风湿的传统功效相一致的。本实验分离鉴定了巴戟天中的主要环烯醚萜苷---水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸,并对巴戟天药材进行了指认;建立了简便快捷分离和测定水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸的方法,并制备了足够的对照品;筛选出了纯化水晶兰苷的吸附材料,考察了影响颗粒活性碳纯化水晶兰苷的因素,同时,对水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸的稳定性进行了初步研究。具体内容如下:(1)分离并鉴定了巴戟天中的主要环烯醚萜苷-水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸,并在原药材的HPLC图上对其进行了指认;建立了简便、快捷的自巴戟天中分离制备水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸的方法:使用粉末活性碳对巴戟天中的水晶兰苷进行富集,纯化物在甲醇中析出水晶兰苷结晶,运用反相硅胶快速制备系统对析出水晶兰苷后的母液进行纯化,纯化物在甲醇-丙酮中析出去乙酰基车叶草苷酸晶体,为巴戟天进一步的质控和后续的稳定性研究、药效学研究提供基础。(2)以水晶兰苷为指标,HPLC为检测手段,考察了不同型号的大孔吸附树脂和活性碳对巴戟天中主要主要环烯醚萜苷-水晶兰苷的吸附效果。筛选出了吸附和解吸附效果较好的颗粒活性碳,并考察了影响颗粒活性碳吸附水晶兰苷的因素,筛选出了最佳的药液浓度、吸附温度、洗脱溶剂,分别为吸附药液浓度0.25g/ml,吸附温度80℃,吸附时间为8h,洗脱溶剂为20%乙醇。除杂溶剂用水,大量冲洗,在此条件下,将水晶兰苷的含量由提取物中的不到2%提高到了6%以上。(3)初探了巴戟天系列纯化物对大鼠脑微血管内皮细胞的影响,其中,BJT-1各浓度组100ng/ml~100ug/ml与control组比较,可以明显提高正常脑微血管内皮细胞的活力,BJT-2、BJT-3、BJT-4各浓度组有提高正常脑微血管内皮细胞活力的趋势,而BJT-1,BJT-2,BJT-3和BJT-4在不同浓度下没有拮抗缺氧对BMEC损伤的作用。(4)考察了巴戟天中主要环烯醚萜苷的稳定性,在一定储存年限内,水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸在药材中是稳定的,含量变化在可以认可的范围内;在中性和偏碱性溶液条件下,水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸也是稳定的,结构未发生变化;在酸性条件下,水晶兰苷会脱水发生烯丙基离子的重排,转化为能量更低的去乙酰基车叶草苷酸,同时又有另外的水解产物(可能是去乙酰基车叶草苷酸苷元)的生成。(5)建立了巴戟天中主要环烯醚萜苷水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸的含量测定方法,色谱条件:色谱柱为艾杰尔公司Venusil MP C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(5:95,30min);流速为1ml.min-1;检测波长为235nm;结果水晶兰苷在54~1 724μg.ml-1、乙酰基车叶草苷酸在23~742μg.ml-1范围内线性关系良好,并测定了收集到的采购于广东和广西的15个巴戟天样品中水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸的含量,其中,生巴戟天中水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸的平均含量在0.9%-1.0%、0.4%-0.5%左右,制巴戟天中二者的含量变化比较大。
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