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猪流感(swine influenza,SI)是由正黏病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(swineinfluenza virus,SIV)引起的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病。值得重视的是,猪群中SI与其他病毒,特别是猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染的现象较普遍。目前,SI的治疗尚无特效药。应用中草药防治SI,前景广阔。 本文参照GenBank中已发表的基因序列,针对病毒保守区序列,设计3对引物用于扩增SIV、PCV-2、PRRSV的目的片段。通过反应条件的优化和临床病例的检测,建立起鉴别SIV、PCV-2、PRRSV的三联PCR诊断方法。试验结果显示成功建立和优化了SIV、PCV-2、PRRSV3种病原的三联PCR检测体系,其最低检测限可达10-4-10-5数量级。用三联PCR和单项PCR/RT-PCR检测40份临床病料,符合率为100%。结果提示本试验建立的三联PCR诊断方法能够对SIV、PCV-2、PRRSV单一或混合感染的临床样品进行快速鉴别和诊断,具有较大的应用价值。 为了研究中药抗SIV的效果,试验通过先加中药再加病毒、先加病毒再加中药以及中药和病毒混合后一起加等三种加药方式,采用鸡胚培养法和红细胞凝集(HA)试验研究了桂枝等15种单味中药在体外抗SIV的效果。在此基础上,将具有显著效果的中药筛选出,再根据中药配伍原则组成8种复方进行体外研究。由此得出体外抗SIV效果较明显的3种复方中药,进行小鼠体内抗SIV的效果研究。结果显示桂枝、麻黄、赤芍药和贯众对SIV具有阻断、抑制和直接杀灭作用;柴胡、金银花、连翘和黄芪四种中药对SIV具有阻断和直接杀灭作用;黄岑对SIV具有抑制和直接杀灭作用;知母、板蓝根和一点红对SIV具有直接杀灭作用;8种中药复方制剂对SIV具有不同程度的阻断、抑制和直接杀灭作用,但复方二、复方四、复方七抗SIV效果较显著;动物实验表明:复方二组、复方四组、复方七组对SIV感染小鼠的保护率、平均存活时间和延长寿命率均高于模型对照组,肺指数低于模型对照组,与模型对照组相比IL-2、INF-γ上升,TNF-α下降。结果提示:复方二、复方四、复方七抗SIV效果显著,且能提高机体免疫力。 此外,试验通过采用鸡胚感染试验和Klein-Defors悬浮灭活试验,研究了不同浓度的戊二醛等八种消毒剂对H3N2亚型SIV的灭活效果,以此来探讨8种消毒剂与病毒在不同作用时间对SIV的杀灭效果。结果显示复方消毒剂、戊二醛、过氧乙酸杀灭SIV效果较为显著,其他依次是复合酚、氢氧化钠、二氯异氰尿酸钠、苯扎溴铵、聚维酮碘。建议8种消毒剂的工作浓度为复合酚1:2000、二氯异氰尿酸钠1:800、过氧乙酸1:10000、苯扎溴铵1:300、戊二醛1:20000、氢氧化钠1:1000、聚维酮碘1:50、复合消毒剂1:20000。为更好地建立SI防疫体系提供实验支持。