子痫前期（Preeclampsia, PE）是指妊娠20周后，以高血压和蛋白尿为主要表现特征的一种常见病症，严重威胁孕产妇及胎儿的健康，是发展中国家导致孕产妇死亡的主要原因之一。PE的发病率和死亡率较高，有报道指出PE的全球发病率约为5%-14%，是导致围生期母婴死亡的主要原因之一，发展中国家孕妇PE致死率约为10%-15%。PE的发生发展过程复杂，与遗传因素、氧化应激、免疫失衡、过度炎症反应、胎盘形成异常和异常缺血等多种因素有关，但其具体病因及发病机制尚未完全阐明。有报道指出，辅助性T细胞（T help cells, Th）及其分泌的白细胞介素（Interleukin, IL）家族成员在子痫前期的发病中发挥重要作用。Th细胞亚群主要包括Th1、Th2、Th17和调节性T细胞（Treg），其中Th1细胞通过分泌IL-1、IL-12及γ干扰素（Interferon-γ, IFN-γ）等细胞因子诱导细胞毒性，参与免疫应答反应；Th2细胞能分泌IL-4、IL-13及IL-10等细胞因子参与体液免疫及炎症反应；Th17分泌IL-17、IL-22等细胞因子，参与多种免疫功能失调的疾病；Treg则通过分泌转化生长因子-β（Transforming growth factor-β, TGF-β）、IL-10等细胞因子发挥免疫调节作用。研究表明，正常妊娠时，孕妇体内Th1/Th2处于平衡状态，Th2型细胞因子处于优势地位，保护母体不受外来微生物侵犯及抑制宫内胚胎移植出现的免疫排斥反应，而子痫前期患者Th1/Th2平衡被打破，致使Th1处于优势地位，进而导致疾病的发生。母体炎症及免疫系统的异常改变，导致子宫螺旋小动脉浸润不良、胎盘浅着床、胎盘循环受阻，从而引起胎盘缺血缺氧，进而影响胎儿的正常发育，同时也引起母体高血压、水肿、蛋白尿的发生。进一步研究发现，PE患者体内， Th17细胞表达上调，进而造成母体免疫耐受失衡，最终可导致PE的发生。现有的研究表明，炎症的过度表达对子痫前期（PE）的出现发挥了巨大的作用，其中，白介素-22 （IL-22）水平的升高可激发炎症反应的出现和细胞的增殖，进一步导致一些促炎因子的产生，如白细胞介素-1（IL-1），白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-8（IL-8）。白细胞介素22（IL-22）属于IL-10超家族成员，主要由活化的CD4+辅助性T细胞、Th17细胞、CD8+细胞毒性T细胞、自然杀伤（Natural killer, NK）细胞等分泌。有研究表明，子痫前期患者Th17细胞分泌的IL-17、IL-22、IL-21及人类白细胞抗原-g （ Human leucocyte antigen-G,HLA-G）等细胞因子水平与正常健康人群之间存在显著差异。进一步研究发现，PE患者胎盘组织和血清中IL-21、IL-17和IL-22的表达增强可能与PE的发生发展有关。为明确IL-22及其受体IL-22RA基因与子痫前期是否存在相关性，本研究对IL-22 rs2227485及其受体IL-22RA1 rs3795299两个位点的基因多态性进行了研究。目的 本研究通过分析PE患者与正常对照人群血清中IL-22及IL-17的表达水平，探讨炎症反应是否参与PE发病的机制，并进一步分析了IL-22 rs2227485及其受体IL-22RA1 rs3795299两个位点基因多态性与PE的相关性，为进一步阐明PE的发病机制奠定基础。方法 本研究采用病例对照研究，收集2013年1月-2015年11月在青岛大学附属医院、临沂人民医院、枣庄人民医院、滨州医学院附属医院、菏泽人民医院和聊城人民医院产科住院分娩的中国汉族妊娠妇女，其中PE患者1070例，正常足月妊娠妇女1263例。以我国妊娠期高血压疾病指导指南为主，结合美国国家高血压教育项目工作组（National High Blood Pressure Education Program Working Group)2013年的报告、美国妇产科医师协会（the American College of Obstetricians and Gynecologists ，ACOG ）的公告[3]和第23版《Williams Obstetrics》的诊断标准定义病例组所有子痫前期病例，并对重度、轻度PE进行分类。收集和整理PE病例组和对照组的一般资料，包括孕妇的年龄、孕周、生育史等，其他入院信息包括系统性的病史、全身和盆腔检查、生化分析、完整的血细胞计数和尿常规检查等；同时采集研究对象的血液样本进行血清IL-22、IL-17的检测及DNA的提取。抽取每个受试者的外周血2ml自然凝固2h，1000r/min离心20min，收集血清，置-80℃冰箱冷冻存贮，以备检测IL-22和IL-17水平。抽取2ml外周血置于抗凝管中，置于-80℃冰箱冷冻存贮，以备提取全血DNA。参照试剂盒说明书，使用ELISA试剂盒检测PE患者及对照组血清IL-22和IL-17的表达水平；按照血液基因组提取试剂盒的操作步骤进行血液样本DNA的提取；采用Taqman探针实时荧光定量PCR技术分析了IL-22基因上位点rs2227485及IL-22受体α1基因(IL-22RA1)上位点rs3795299的单核苷酸多态性的基因分型。应用SPSS 21.0统计软件（SPSS Inc., Chicago，IL, USA）进行数据统计分析。轻度PE、重度PE和正常对照组三组间的数据比较分析采用方差分析，相关性分析采用Pearson相关统计学方法进行分析。人口学特征和临床资料（年龄、孕周等）采用Student’s t-检验。采用单因素方差分析对病例组进行基因型-表型相关性分析。群体代表性检验采用Hardy-Weinberg平衡检验，两组间基因分布差异的比较采用Pearson卡方检验。ORs（Odds ratios）和95%置信区间（Confidence intervals，CIs）表示相对危险度，均以P<0.05代表具有统计学意义。　　结果:　　（1）血清IL-22和IL-17的水平：PE患者与健康对照人群血清IL-22和IL-17水平具有统计学差异（P<0.05），对照组人群、轻度PE患者及重度PE患者血清中的IL-22水平分别为50.75 ng/L、66.58 ng/L和76.03ng/L，其中轻度和重度PE患者血清IL-22水平均显著高于对照组（P<0.05），但轻度PE患者血清IL-22与重度PE患者之间的差异无统计学意义（P>0.05）；对照组人群、轻度PE患者及重度PE患者血清中的IL-17水平分别为48.97ng/L、67.55 ng/L和85.32ng/L，重度PE患者血清IL-17水平显著高于对照组和轻度PE组，且PE越严重，血清IL-17水平越高。　　（2）人口学及临床特征：PE病例和对照组之间在怀孕和流产方面无显著统计学差异（P>0.05）。 然而PE患者的胎龄、分娩孕龄、和婴儿出生体重均显著低于对照组（P<0.001），具有统计学差异。 PE患者的收缩压、舒张压、白细胞数量和嗜中性粒细胞数量，甘油三酯水平、尿素氮、肌酸酐、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和总胆固醇（P=0.001）均显著高于对照组，具有统计学意义；　　（3）Haddy-Weinberg平衡检验：IL-22 rs2227485（χ2=1.000，P=0.317）和IL-22RA1 rs3795299（χ2=5.566，P=0.059）在对照组中的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，说明本研究纳入的对照组人群具有良好的群体代表性；　　（4）IL-22rs2227485及其受体IL-22RA1 rs3795299的基因型与等位基因频率与PE的相关性：在基因型频率（rs2227485，χ2=18.746，P<0.001；rs3795299，χ2=25.694，P<0.001）方面，PE患者和对照两种多态性之间的差异具有统计学意义。此外，两组间的rs3795299等位基因频率也存在显著统计学差异（χ2=12.036，P<0.001，OR=1.253,95％CI 1.103-1.424）；　　（5）等位基因显性模型评估rs2227485 和rs3 P 795299：rs2227485在T等位基因的隐性模型下观察到显著统计学差异（P<0.05），TT基因型能显著降低PE的发病风险（TT vs CT+CC,χ2=17.632，P<0.001，OR=0.620, 95％CI:0.495-0.776），C等位基因显著增加PE的患病风险（C vs T,χ2=12.036，P<0.001，OR=1.253, 95％CI:1.103-1.424）；rs3795299在G等位基因的显性模型下检测到显著统计学差异（P<0.05），GG基因型显著降低PE的发病风险（χ2=21.911，P<0.001，OR=0.677，95％CI：0.575-0.797），G等位基因显著降低了PE的患病风险（χ2=12.036，P<0.001，OR=1.253，95％CI：1.103-1.424）；　　（6） PE分度与IL-22rs2227485及IL-22RA1 rs3795299的等位基因和等位基因频率的相关性：对照组和轻度PE患者之间rs2227485的基因型和等位基因频率之间的差别无统计学意义（基因型χ2=1.788，P=0.409；等位基因χ2=1.622，P=0.203，OR=0.873，95％CI：0.708-1.076）。对照组和重度PE患者之间rs2227485的基因型分布有显著统计学意义（基因型χ2=30.274，P<0.001）。此外，对照组与轻度PE、重度PE患者之间rs3795299的基因型和等位基因频率之间的差异也存在统计学意义（轻度PE vs对照组：基因型χ2=43.682，P<0.001；等位基因χ2=7.388，P=0.007，OR=1.364，95％CI：1.090-1.708；重度PE vs对照组：基因型χ2=13.245，P=0.01；等位基因χ2=9.413，P=0.002，OR=1.239，95％CI：1.080-1.422）；　　（7）基因型-表现型关系：对于IL-RA1rs3795299来说，携带CC+CG基因型的PE患者诊断孕龄、胎儿胎龄、新生儿初生重、收缩压和舒张压显著低于携带GG基因型的PE患者（P<0.05），结果具有统计学意义。相反，IL-22 rs2227485的基因型与PE患者人口统计学、血清生化指标、临床特征之间无显著统计学意义（P>0.05），说明rs2227485的基因型与PE患者表现型之间无显著关联性。　　结论：　　本研究进一步证实了炎症反应与子痫前期发生具有密切关系，且 IL-22基因rs2227485及其受体IL-22RA1基因 rs3795299多态性可能与子痫前期的易感性有关，但还需要更多的研究对其进行验证。